附件：凝血酶原時間/活化部分凝血活酶時間/凝血酶時間/纖維蛋白原檢測試劑產(chǎn)品注冊審查指導(dǎo)原則（2021年第104號）.doc

凝血酶原時間/活化部分凝血活酶時間/凝血酶時間/纖維蛋白原檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對凝血酶原時間/活化部分凝血活酶時間/凝血酶時間/纖維蛋白原（以下簡稱“凝血四項”）檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是針對凝血四項試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

凝血四項包括凝血酶原時間（prothrombin time，PT）、活化部分凝血活酶時間（activated partial thromboplastintime，APTT）、凝血酶時間（thrombin time，TT）和纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB），是臨床上常用的凝血功能檢查的檢測指標(biāo)，主要用于凝血障礙性疾病的初步診斷、抗凝藥物的治療監(jiān)測以及常規(guī)凝血功能的評估等。

從方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則適用于基于血液凝固法原理，利用手工法、半自動以及全自動凝血分析儀（光學(xué)法、磁珠法），對人血漿樣本中的凝血四項指標(biāo)，包括凝血酶原時間（Quick一期法）、活化部分凝血活酶時間、凝血酶時間、纖維蛋白原（Clauss法），進(jìn)行體外定量檢測的試劑。不適用于床旁快速檢測（POCT）及口服抗凝藥治療自測體外監(jiān)測的試劑。

二、注冊審查要點

注冊申報資料的撰寫應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊申報資料要求及說明》的相關(guān)要求。

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品名稱一般由三部分組成。第一部分：被測物質(zhì)的名稱，如凝血酶原時間;第二部分：用途，如測定試劑盒;第三部分：方法或者原理，如凝固法等，本部分應(yīng)當(dāng)在括號中列出。

2.分類依據(jù)

根據(jù)《體外診斷試劑分類子目錄》，凝血四項檢測試劑管理類別為二類，分類編碼為6840。

3.注冊單元劃分

從適用樣本類型及方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則所述凝血四項檢測試劑的注冊單元原則上按照單個檢測項目進(jìn)行劃分。不建議不同檢測項目的組合作為同一注冊單元。

各單項檢測試劑如包含不同的包裝規(guī)格，不同規(guī)格間僅試劑組分裝量或檢測數(shù)有差異，原則上劃分為同一注冊單元;如包含不同的包裝規(guī)格，不同規(guī)格間除試劑裝量或檢測數(shù)的差異外，適用于不同的儀器機(jī)型，原則上劃分為同一注冊單元。

校準(zhǔn)品、質(zhì)控品可以與配合使用的凝血四項檢測試劑合并申請注冊，也可以單獨申請注冊。

（二）綜述資料

主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報產(chǎn)品上市歷史等內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品描述

1.1產(chǎn)品綜述

應(yīng)著重描述：1）產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理及適用儀器的檢測原理，如光學(xué)法（透射比濁法、散射比濁法）、磁珠法等;2）主要生物活性原料（如組織凝血活酶、激活劑、磷脂、凝血酶等）的生物學(xué)來源、供應(yīng)商名稱及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（同時附供應(yīng)商提供的出廠檢定報告）;3）組織凝血活酶的國際敏感指數(shù)（international sensitivity index，ISI）標(biāo)定情況;4）校準(zhǔn)品（如有）的量值溯源情況，質(zhì)控品（如有）的制備、賦值情況等。

1.2與同類和/或前代產(chǎn)品的比較

應(yīng)著重從預(yù)期用途、主要組成成分（原材料生物學(xué)來源、激活劑類型）、適用儀器檢測原理、標(biāo)準(zhǔn)化及溯源、主要性能指標(biāo)、參考區(qū)間等方面寫明擬申報產(chǎn)品與境內(nèi)、外已上市同類產(chǎn)品和/或前代產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

2.臨床適應(yīng)證

PT臨床上主要用于外源性凝血系統(tǒng)功能缺陷的篩查和口服抗凝劑治療監(jiān)測。PT對外源性和共同凝血途徑的凝血因子（Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ）的缺陷以及這些凝血因子抑制物的存在敏感，也是口服維生素K拮抗劑（如華法林）治療的首選監(jiān)測指標(biāo)。此外，PT還可用于彌散性血管內(nèi)凝血的檢測以及檢測肝臟的蛋白質(zhì)合成功能。臨床上PT結(jié)果的報告方式有：直接報告PT值（秒）、百分比活性（%）、凝血酶原時間比值（prothrombin time ratio，PTR）以及國際標(biāo)準(zhǔn)化比值（international normalized ratio，INR）。

APTT臨床上主要用于內(nèi)源性凝血系統(tǒng)功能缺陷的篩查和肝素抗凝治療監(jiān)測。APTT對內(nèi)源性凝血途徑（凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ，前激肽釋放酶和高分子量激肽原）和共同凝血途徑（因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ）的缺陷敏感，常用于臨床監(jiān)測普通肝素抗凝治療效果，還可用于其它病理類型的凝血抑制物的篩查（如狼瘡抗凝物）。

TT臨床上主要用于反映血漿纖維蛋白原含量或結(jié)構(gòu)異常，如低（無）FIB血癥和異常纖維蛋白血癥時TT延長或縮短，還可用于反映纖溶系統(tǒng)功能，如纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物的增高。

FIB 臨床上主要用于彌散性血管內(nèi)凝血、原發(fā)性纖溶癥的輔助診斷以及溶栓療效的監(jiān)測。增高見于糖尿病和糖尿病酸中毒、動脈血栓栓塞（急性心肌梗死發(fā)作期）、急性傳染病、結(jié)締組織病、急性腎炎和尿毒癥、放射治療后、燒傷、休克、老年人外科大手術(shù)后、妊娠晚期和妊娠期高血壓病、輕型肝炎、敗血癥和急性感染等。減少見于彌散性血管內(nèi)凝血和原發(fā)性纖溶癥、重癥肝炎和肝硬化等，也見于降纖藥治療和溶血治療。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品風(fēng)險分析資料

申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進(jìn)行風(fēng)險分析。（參照YY/T 0316《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》）

2.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

2.1產(chǎn)品技術(shù)要求

應(yīng)符合《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的相關(guān)規(guī)定。申請人可參照已發(fā)布行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對產(chǎn)品技術(shù)要求中性能指標(biāo)及檢驗方法內(nèi)容進(jìn)行編寫，同時應(yīng)當(dāng)符合適用的強制性標(biāo)準(zhǔn)。（參照YY/T 1156《凝血酶時間檢測試劑（盒）》、YY/T 1157《活化部分凝血活酶時間檢測試劑（盒）》、YY/T 1158《凝血酶原時間檢測試劑（盒）》、YY/T 1159《纖維蛋白原檢測試劑（盒）》）

2.2產(chǎn)品檢驗報告

應(yīng)提交按產(chǎn)品技術(shù)要求進(jìn)行檢驗的檢驗報告，可以是申請人的自檢報告，也可以是委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗機(jī)構(gòu)出具的檢驗報告。檢驗用產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)能夠代表申請注冊產(chǎn)品的安全性和有效性，其生產(chǎn)應(yīng)當(dāng)符合醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的相關(guān)要求。有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品的，應(yīng)當(dāng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對產(chǎn)品進(jìn)行檢驗。

3.分析性能研究

申請人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行的所有性能評估驗證的研究資料，對于每項分析性能的研究都應(yīng)包括研究目的、試驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細(xì)資料。有關(guān)研究背景信息也應(yīng)在資料中有所體現(xiàn)，包括試驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號和臨床樣本來源等。分析性能評估的試驗方法可以參考相關(guān)國內(nèi)或國外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

如申報產(chǎn)品適用不同的機(jī)型，需要提交在不同機(jī)型上進(jìn)行評估的資料。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格進(jìn)行分析或驗證。

3.1樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性研究主要包括室溫、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證。有關(guān)樣本采集、處理、運輸及保存等的詳細(xì)內(nèi)容，申請人可參考WS/T 359《血漿凝固實驗血液標(biāo)本的采集及處理指南》或CLSI H21等相關(guān)文件，合理選擇樣本保存條件并通過試驗進(jìn)行分析驗證，從而確認(rèn)樣本的效期穩(wěn)定性。

3.2適用的樣本類型

用于分析性能評估用樣本應(yīng)為枸櫞酸鈉抗凝血漿樣本。血漿抗凝劑濃度為105mmol/L～109mmol/L（3.13%～3.2%，通常定為3.2%），與實際臨床檢測中使用的抗凝劑保持一致，不能使用其他抗凝劑（如草酸鹽、肝素或EDTA等）。樣本類型包括新鮮樣本、冰凍血漿和凍干血漿。評估試驗在樣本采集后規(guī)定時間內(nèi)不能完成時，推薦使用冰凍或者凍干血漿進(jìn)行評估，其中冰凍血漿又優(yōu)于凍干血漿。如果使用冰凍血漿，應(yīng)保存在-70℃以下，在-20℃保存超過2周即可使某些凝血因子失活，其結(jié)果不能和新鮮血漿比較。

3.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）

應(yīng)提供詳細(xì)的產(chǎn)品溯源性研究資料，且檢測結(jié)果的量值應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國家或國際標(biāo)準(zhǔn)品。對于企業(yè)內(nèi)部參考血漿（制造商工作校準(zhǔn)品）、試劑盒產(chǎn)品校準(zhǔn)品應(yīng)提供詳細(xì)的賦值試驗資料和溯源性文件等。如包含PT/INR標(biāo)定血漿，建議參照CLSI H54文件提供詳細(xì)的賦值和驗證過程研究資料。質(zhì)控品應(yīng)提供在所有適用機(jī)型上的賦值及其靶值范圍確定的研究資料。

3.4 ISI標(biāo)定（PT適用）

對于PT試劑應(yīng)提供組織凝血活酶（適用于手工法）、組織凝血活酶/儀器特異性的ISI標(biāo)定的詳細(xì)研究資料，ISI應(yīng)通過與WHO凝血活酶國際參考品（international reference preparation，IRP）比較，并按照WHO指南標(biāo)準(zhǔn)測量程序進(jìn)行標(biāo)定。（注：通常，由WHO國際參考品標(biāo)定企業(yè)內(nèi)部參考試劑ISI，再由企業(yè)內(nèi)部參考試劑對每一批次試劑進(jìn)行ISI標(biāo)定）。

3.5準(zhǔn)確度

針對本類產(chǎn)品的準(zhǔn)確度評價方法主要包括：與國家或國際標(biāo)準(zhǔn)品的相對偏差、方法學(xué)比對等方法，申請人可根據(jù)實際情況選擇以下方法的一項或幾項進(jìn)行研究。

3.5.1相對偏差

用國家或國際標(biāo)準(zhǔn)品測試，重復(fù)測試多次，計算均值與標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)示值的相對偏差，所得結(jié)果應(yīng)符合相應(yīng)的接受標(biāo)準(zhǔn)。

3.5.2方法學(xué)比對

采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為比對方法，與擬申報試劑同時檢測一批臨床樣本，通過兩者的比對研究和偏倚估計，進(jìn)行申報試劑的準(zhǔn)確度評價。其中，PT、APTT、TT評價樣本應(yīng)包含正常樣本及不同病理水平異常樣本，F(xiàn)IB樣本的選擇應(yīng)盡可能覆蓋其分析測量范圍并盡量均勻分布。PT試劑應(yīng)對聲稱的每一種可報告方式進(jìn)行方法學(xué)比對分析。

除進(jìn)行上述方法學(xué)比對外，PT、APTT試劑還需進(jìn)一步進(jìn)行試劑敏感性的評價，具體如下：

3.5.2.1 PT/INR

PT試劑預(yù)期用于口服抗凝劑的治療監(jiān)測時，應(yīng)選擇至少40例接受維生素K拮抗劑（如華法林）治療的患者樣本，其中INR2.0～4.5為30例，INR＜2.0為5例，INR＞4.5為5例，與已上市試劑或參考方法相比，位于治療區(qū)間（2.0～4.0）內(nèi)的85%樣本需滿足不超過±0.5INR單位的要求。

3.5.2.2 APTT

用于APTT試劑方法學(xué)比對的樣本包括正常樣本、接受普通肝素治療患者樣本、含狼瘡抗凝物樣本以及凝血因子缺乏的樣本。

APTT試劑預(yù)期用于普通肝素治療的監(jiān)測時，應(yīng)通過至少20例接受普通肝素治療的患者樣本進(jìn)行評價，樣本的選擇應(yīng)能覆蓋肝素的治療范圍，并注意避免使用體外模擬添加肝素的樣本。（注：申請人可參照CLSI H47文件推薦的方法建立監(jiān)測普通肝素治療的APTT參考區(qū)間。）

3.6精密度

影響精密度的條件包括：操作者、測量儀器、測量程序、試劑批次（lot）、校準(zhǔn)（校準(zhǔn)品批次，校準(zhǔn)周期）、運行（run）、時間、地點、環(huán)境條件（實驗室溫度、濕度、空氣質(zhì)量、管理等）等。

針對本類產(chǎn)品的精密度評價主要包括以下要求：

3.6.1根據(jù)各測量條件對檢測結(jié)果影響程度的分析設(shè)計試驗方法，進(jìn)行重復(fù)性、實驗室內(nèi)精密度、實驗室間精密度、和批間精密度評價，應(yīng)對每項精密度指標(biāo)的評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。一般應(yīng)設(shè)定合理的評價周期，即在多天內(nèi)進(jìn)行測試，并在評價過程中考慮納入前述可能影響精密度的不同條件，不必對每個測量條件進(jìn)行單獨評估，可在試驗設(shè)計中納入多個測量條件。

3.6.2精密度的評價應(yīng)至少選擇2～3個水平的血漿樣本進(jìn)行，一般來說應(yīng)包含正常血漿、高值異常血漿等，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫蟆?/p>

3.6.3 PT試劑應(yīng)對聲稱的每一種可報告方式進(jìn)行精密度評價。

3.7定量限（FIB適用）

建議申請人參照國內(nèi)相關(guān)性能評估文件或CLSI EP17文件推薦的定義和設(shè)計方案，對申報產(chǎn)品的定量限（LoQ）進(jìn)行合理評估和驗證。

3.8干擾物質(zhì)研究

對樣本中常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測，如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。

外源性干擾物質(zhì)通常包括常用藥物及其代謝物、患者群體使用的藥物及其代謝物等，建議申請人充分考慮已報道對類似試劑或測量程序存在干擾的物質(zhì)，并根據(jù)產(chǎn)品特點選擇潛在的干擾物質(zhì)進(jìn)行驗證。

干擾物質(zhì)研究的樣本可采用臨床或模擬添加樣本進(jìn)行驗證，建議至少包含正常、異常/病理兩個水平的樣本。

3.9線性區(qū)間（linearity interval）（FIB適用）

線性區(qū)間的研究，需采用高值和低值樣本配制一系列不同濃度的樣本。當(dāng)建立試劑的線性區(qū)間時，需配制出較預(yù)期線性區(qū)間更寬的至少9個左右不同濃度的樣本，每個樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測，根據(jù)可接受線性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測次數(shù)。采用重復(fù)檢測均值和預(yù)期值進(jìn)行直線回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點圖、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷結(jié)果是否滿足可接受標(biāo)準(zhǔn)。

當(dāng)驗證試劑的線性區(qū)間時，需配制覆蓋整個線性區(qū)間的至少5個不同濃度的樣本，每個樣本至少重復(fù)檢測2次。

4.穩(wěn)定性研究

穩(wěn)定性研究主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、運輸穩(wěn)定性、開瓶（在機(jī)）穩(wěn)定性及復(fù)溶穩(wěn)定性（如涉及）等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

5.參考區(qū)間確定資料

應(yīng)提交建立參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細(xì)的試驗資料。研究樣本來源應(yīng)覆蓋年齡、性別等因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)（如：未接受過藥物治療，且過去18～24小時內(nèi)未進(jìn)行過劇烈運動），研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)通常應(yīng)不低于120例。（注：研究例數(shù)不低于120例是為了保證能正確估計參考限的90%置信區(qū)間。申請人應(yīng)根據(jù)預(yù)設(shè)的置信區(qū)間水平進(jìn)行樣本研究例數(shù)的選擇并符合統(tǒng)計學(xué)要求。）

若引用針對中國人群參考區(qū)間研究的相關(guān)文獻(xiàn)，應(yīng)明確說明出處，并進(jìn)行驗證。

樣本應(yīng)采用新鮮樣本（室溫，4小時內(nèi)）和/或-70℃冷凍血漿，冷凍血漿應(yīng)在37℃水浴中迅速融化，輕輕混勻立即測定。

6.其他資料

6.1主要原材料研究資料（如需提供）

應(yīng)提交主要原材料的來源、篩選研究過程、制備過程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及檢驗資料等。如為申請人自制，應(yīng)提交詳細(xì)制備方法及過程，并應(yīng)保證工藝相對穩(wěn)定;如為外購，應(yīng)注意明確原材料的供應(yīng)商，并應(yīng)提交供應(yīng)商提供的原材料質(zhì)量檢定報告。

6.1.1組織凝血活酶

組織凝血活酶的常見生物學(xué)來源有重組人組織因子、人胎盤、兔腦、牛腦等。如為外購，應(yīng)詳述其名稱、生物學(xué)來源、供應(yīng)商名稱、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等。

由于不同組織凝血活酶對凝血因子缺乏的敏感性不同。為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測 PT 中能得到同樣的結(jié)果，需提供組織凝血活酶ISI（適用于手工法）、組織凝血活酶/儀器特異性ISI。

6.1.2磷脂（部分活化凝血活酶）

磷脂的生物學(xué)來源有人、動物、植物以及合成磷脂等。如為外購，應(yīng)詳述其名稱、生物學(xué)來源、供應(yīng)商名稱、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等。

需要注意的是，某些凝血活酶和部分活化凝血活酶并不一定與某些儀器相匹配。渾濁的或含微粒的凝血活酶和部分活化凝血活酶可能無法運用通過光學(xué)系統(tǒng)測定終點的儀器進(jìn)行檢測。

6.1.3激活劑

激活劑主要類型有硅土、硅藻土、二氧化硅微粒、白陶土、鞣花酸等。如為外購，應(yīng)詳述其名稱、供應(yīng)商名稱、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等。

不同的激活劑對肝素、狼瘡抗凝物及因子Ⅷ、Ⅸ缺乏的敏感性不同，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途合理選擇激活劑進(jìn)行評估。

6.1.4凝血酶

凝血酶的常見生物學(xué)來源有重組人凝血酶、人血漿、牛血漿等。如為外購，應(yīng)詳述其名稱、生物學(xué)來源、供應(yīng)商名稱、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等。

6.1.5試劑盒校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（如有）

應(yīng)包括原材料選擇、制備、賦值過程及試驗資料。校準(zhǔn)品應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國家或國際標(biāo)準(zhǔn)品。質(zhì)控品一般包含正常值和異常/病理值兩個水平，申請人可視申報產(chǎn)品具體情況合理設(shè)置質(zhì)控品。

如包含PT/INR標(biāo)定血漿（certified plasmas），建議根據(jù)其預(yù)期用途（如：用于臨床實驗室ISI校準(zhǔn)、繪制INR校準(zhǔn)曲線或INR系統(tǒng)驗證等），參照CLSI H54文件的方法進(jìn)行原材料的選擇、制備、賦值和驗證。

6.2主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

6.2.1主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定方法，如各組分制備的工藝、試劑的配方及關(guān)鍵工藝參數(shù)的確定等。

6.2.2主要反應(yīng)體系的研究資料，包括樣本采集及處理、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法（如有）、質(zhì)控方法等。

6.2.3不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別闡述。

（四）臨床評價資料

根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關(guān)要求，如申請項目已列入《免于臨床試驗體外診斷試劑目錄》，申請人可按照《免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術(shù)指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行臨床評價。

如申請項目未列入《免于臨床試驗體外診斷試劑目錄》，或申請人無法按要求開展臨床評價的，則應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求開展臨床試驗。下面僅對臨床試驗中的特殊問題進(jìn)行闡述。

1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。應(yīng)充分了解參比試劑的技術(shù)信息，包括適用儀器方法學(xué)（光學(xué)法、磁珠法）、臨床預(yù)期用途、主要性能指標(biāo)、校準(zhǔn)品的溯源情況（如有）、推薦的參考區(qū)間等，以便對試驗結(jié)果進(jìn)行科學(xué)的分析。

1.1 PT試劑盡量選擇組織凝血活酶生物學(xué)來源一致的，如同為人重組組織因子，或同為兔腦來源等。

1.2 APTT試劑應(yīng)充分考慮激活劑的類型，如鞣花酸、硅藻土等。

2.研究對象

臨床試驗應(yīng)選擇產(chǎn)品的預(yù)期適用人群作為研究對象，入組人群應(yīng)能夠代表產(chǎn)品適用人群的各種類型（如：術(shù)前凝血功能檢查、常規(guī)凝血功能評估、先天及后天性凝血因子缺乏等），所有樣本均應(yīng)可以溯源。每個項目樣本例數(shù)應(yīng)分別滿足統(tǒng)計學(xué)要求，其中，PT、APTT、TT應(yīng)包含正常樣本及不同病理水平異常樣本，F(xiàn)IB樣本的選擇應(yīng)盡可能覆蓋其分析測量范圍并盡量均勻分布。考慮到PT、APTT試劑敏感性的差異，其入組樣本應(yīng)進(jìn)一步滿足如下要求：

2.1 PT/INR

PT試劑預(yù)期用于口服抗凝劑的監(jiān)測時，應(yīng)選擇至少40例接受維生素K拮抗劑（如華法林）治療的患者樣本進(jìn)行評價，其中INR2.0～4.5為30例，INR＜2.0為5例，INR＞4.5為5例，通過與已上市試劑或參考方法相比，位于治療區(qū)間（2.0～4.0）內(nèi)的85%樣本需滿足不超過±0.5INR單位的要求。

2.2 APTT

應(yīng)包括正常樣本、接受普通肝素治療患者樣本、含狼瘡抗凝物樣本以及凝血因子缺乏的樣本。

APTT試劑預(yù)期用于普通肝素治療的監(jiān)測時，應(yīng)通過至少20例接受普通肝素治療的患者樣本進(jìn)行評價，樣本的選擇應(yīng)能覆蓋肝素的治療范圍，并注意避免使用體外模擬添加肝素的樣本。

3.樣本類型

用于臨床試驗的樣本類型應(yīng)為枸櫞酸鈉（3.2%）抗凝血漿樣本。所有樣本均應(yīng)采用新鮮樣本，并按照說明書樣本穩(wěn)定性要求進(jìn)行離心和檢測。如無法避免使用貯存樣本時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。

4.統(tǒng)計學(xué)分析

4.1應(yīng)根據(jù)數(shù)據(jù)分布特點等因素選擇適用的回歸分析方法，如Deming回歸、Passing-Bablok回歸分析和最小二乘回歸估計等?；貧w分析應(yīng)重點觀察回歸方程（斜率和截距）、相關(guān)系數(shù)（r）或決定系數(shù)（R2）等指標(biāo)，計算斜率和截距的95%可信區(qū)間。亦可同時對相關(guān)評價指標(biāo)進(jìn)行假設(shè)檢驗。

4.2采用Bland-Altman法，通過計算一致性限度，評價兩種測量結(jié)果的一致性，一致性限度應(yīng)在臨床認(rèn)可的界值之內(nèi)。

5.接受境外臨床試驗數(shù)據(jù)要求

如進(jìn)口產(chǎn)品提交境外臨床試驗資料作為臨床評價資料時，其境外臨床試驗資料需滿足《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽應(yīng)滿足《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》和《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。下面對凝血四項檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.【預(yù)期用途】

至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1該產(chǎn)品用于體外定量檢測人血漿樣本中的凝血酶原時間/活化部分凝血活酶時間/凝血酶時間/纖維蛋白原。

1.2簡要說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證及背景情況。說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度信息。生物活性物質(zhì)（如組織凝血活酶、磷脂、凝血酶等），應(yīng)說明其生物學(xué)來源、活性及其他特性;說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（如有），應(yīng)明確具體基質(zhì)成分，此外，校準(zhǔn)品應(yīng)明確溯源性，質(zhì)控品應(yīng)注明靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。

2.3試劑盒中不包含但對該項檢測必須的組分，應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、貨號及其他相關(guān)信息。

2.4PT試劑需注明批特異性ISI值或者提供查詢方式。

3.【儲存條件及有效期】

詳細(xì)介紹試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封/開瓶穩(wěn)定性等信息。注明“生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期：見標(biāo)簽”字樣。

4.【樣本要求】重點明確以下內(nèi)容

4.1樣本的類型：明確適用的樣本類型（靜脈血）以及所用的抗凝劑（3.2%的枸櫞酸鈉抗凝，不宜用EDTA-Na2、肝素、草酸鹽等），分離血漿宜除盡血小板（血小板計數(shù)＜10×10⁹/L）。

4.2樣本的穩(wěn)定性：明確樣本采集后和處理后的保存條件和期限等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需恢復(fù)至室溫、凍融次數(shù)的要求。

4.3參考WS/T 359《血漿凝固實驗血液標(biāo)本的采集及處理指南》或CLSI H21文件獲得更多標(biāo)本采集與處理的信息。

5.【檢驗方法】

應(yīng)詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟：（以手工法/半自動凝血分析儀為例）

5.1試驗準(zhǔn)備：檢測試劑及樣本的復(fù)溫要求及相關(guān)注意事項。

5.2試劑配制方法、注意事項。

5.3試驗條件：操作步驟、溫度、時間等以及試驗過程中的注意事項。

5.4標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（如適用）：詳細(xì)說明校準(zhǔn)品的復(fù)溶方法、稀釋倍數(shù)以及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法。

5.5質(zhì)量控制程序：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

5.6試驗結(jié)果的計算或讀取：需詳細(xì)描述對檢測結(jié)果的判定或計算方法等。

如適用于全自動凝血分析儀，可注明“應(yīng)參照儀器使用說明書操作”，注明校準(zhǔn)周期（如適用）及質(zhì)量控制程序。

6.【檢驗結(jié)果的解釋】

說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素。

7.【檢驗方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，申請人選擇適用的條款在產(chǎn)品說明書中予以闡述。

7.1本產(chǎn)品檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，應(yīng)結(jié)合患者性別、年齡、病史及其他實驗室指標(biāo)等信息綜合考慮。當(dāng)檢驗結(jié)果出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析查找原因并重新確認(rèn)等。

7.2其他可能存在的問題 。

8.【注意事項】建議包括以下內(nèi)容：

8.1僅用于體外診斷。

8.2標(biāo)本有可見的溶血時不應(yīng)采用，因為可能激活凝血因子，干擾最終測定。

8.3使用光學(xué)原理的儀器時，需注意標(biāo)本中存在黃疸、脂血或影響光散射強度的干擾物質(zhì)時，可能對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。

8.4血細(xì)胞比容值≥0.55L/L（55%）時，需調(diào)整血液與抗凝劑的比例。

8.5有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑內(nèi)質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了HBsAg、HIV1/2-Ab、HCV-Ab和TP等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

（六）質(zhì)量管理體系文件

主要包括綜述、生產(chǎn)制造信息、質(zhì)量管理體系程序、管理職責(zé)程序、資源管理程序、產(chǎn)品實現(xiàn)程序、質(zhì)量管理體系的測量、分析和改進(jìn)程序、其他質(zhì)量體系程序信息以及質(zhì)量管理體系核查文件等。

三、參考文獻(xiàn)

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[5]CLSI EP17-A2, Evaluation of Detection Capability for Clinical Laboratory Measurement Procedures; Approved Guideline-Second Edition[S].

[6]CLSI EP28-A3c, Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline-Third Editions[S].

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[8]尚紅,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程（第4版）[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2015.

四、編寫單位

浙江省醫(yī)療器械審評中心。