附件：同型半胱氨酸測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2018年第8號）.doc

同型半胱氨酸測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對同型半胱氨酸測定試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對同型半胱氨酸測定試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

同型半胱氨酸測定試劑用于體外定量測定人血清或血漿中同型半胱氨酸的濃度。從方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則主要指基于分光光度法原理，利用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，在醫(yī)學(xué)實驗室采用酶循環(huán)法進行同型半胱氨酸定量檢驗所使用的臨床化學(xué)體外診斷試劑，根據(jù)測定方法可分為速率法和終點法兩種。

本指導(dǎo)原則不適用于干式同型半胱氨酸測定試劑。依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），同型半胱氨酸測定試劑管理類別為二類，分類代碼為6840。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性方面說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價、同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）相關(guān)要求。下面著重介紹與同型半胱氨酸測定試劑預(yù)期用途有關(guān)的臨床背景情況。

體內(nèi)的同型半胱氨酸（HCY）來源于蛋氨酸，蛋氨酸主要來源于食物。蛋氨酸分子含有甲基，在ATP作用下生成S-腺苷蛋氨酸后，可通過各種轉(zhuǎn)甲基作用為體內(nèi)已知的50多種具有重要生理活性的物質(zhì)提供甲基。血漿中同型半胱氨酸分為結(jié)合型和游離型兩種，以四種分子形式存在。我們通常測定的是血漿中總同型半胱氨酸。國外，1995年Bouskey等匯集分析了27個研究單位、總?cè)藬?shù)為4666例的臨床研究結(jié)果。發(fā)現(xiàn)10%的冠心病患者是由高同型半胱氨酸血癥所致。血漿HCY每增加5mmol/L，相當(dāng)于血清膽固醇增加0.5mol/L（20mg/dL）對血管造成的危害。一項對587例血管造影確診的冠心病患者進行的4.6年隨訪研究，共有64例死亡。四年時間里，同型半胱氨酸水平<9mmol/L者死亡率為3.8%，而相比同型半胱氨酸水平≥15mmol/L者死亡率為24.7%。在分析中，去除其他可能的影響因素（年齡、性別、吸煙史和高膽固醇血癥等），同型半胱氨酸水平為9—14.9mmol/L患者病死率是血清水平<9mmol/L患者的1.9倍（p<0.05）；而同型半胱氨酸水平為15—19.9mmol/L患者病死率則是血清水平<9mmol/L患者的2.8倍（p<0.05）；同型半胱氨酸水平為>20mmol/L患者病死率則是血清水平<9mmol/L患者的4.5倍（p<0.02）。上述研究表明，高同型半胱氨酸血癥是冠心病有力的危險預(yù)測因子。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）

主要原材料（例如酶及其他主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及試驗驗證研究資料；質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料；校準(zhǔn)品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、試驗方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計分析等詳細資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。企業(yè)應(yīng)采用經(jīng)過驗證，能夠保證產(chǎn)品質(zhì)量的生產(chǎn)工藝。

2.主要反應(yīng)體系的研究資料，包括：樣本采集及處理、樣本要求，確定反應(yīng)校準(zhǔn)品、樣本和試劑的用量、緩沖液、時間、波長等條件的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)，校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法等。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)當(dāng)提交對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體的研究項目、試驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法（如有）、研究結(jié)論等詳細資料。性能評估時應(yīng)將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括試驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、臨床樣本來源等。

對于本試劑，建議著重對以下分析性能進行研究：

1.準(zhǔn)確度

對測量準(zhǔn)確度的評價依次包括：與國家標(biāo)準(zhǔn)品（和/或國際標(biāo)準(zhǔn)品）的相對偏差、回收試驗、方法學(xué)比對等方法，申請人可根據(jù)實際情況選擇以下方法的一項或幾項進行研究。

（1）與國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品的相對偏差

如果研究項目有相應(yīng)國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品，則使用國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品進行驗證，重點觀察對相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果的偏差情況。

（2）回收試驗

用于評估定量檢測方法準(zhǔn)確測定加入純品（或標(biāo)準(zhǔn)溶液）的能力，結(jié)果用回收率表示。通常對樣本進行3—5次回收試驗，取平均值即平均回收率。

回收試驗注意事項：

①加入的純品（或標(biāo)準(zhǔn)溶液）體積與人源樣本體積比應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化；

②盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測物濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平（10~20μmol/L）；

③純品（或標(biāo)準(zhǔn)溶液）的濃度應(yīng)該足夠高，以得到不同濃度的回收樣本。

（3）方法學(xué)比對

采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為比對方法，與擬申報試劑同時檢測一批臨床樣品（至少40例樣本），從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與對比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。

在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和比對試劑進行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進行方法學(xué)比對。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。

2.空白吸光度

用試劑在說明書規(guī)定參數(shù)下測試指定空白樣本，記錄測試反應(yīng)完成后的吸光度值（A），測試結(jié)果即為試劑空白吸光度測定值。

注：空白樣本可以是純水、生理鹽水、零校準(zhǔn)液等。

3.空白吸光度變化率（如適用）

用試劑測試指定空白樣本，記錄在試劑規(guī)定參數(shù)下的吸光度差值，空白吸光度變化率（ΔA/min）應(yīng)不大于企業(yè)規(guī)定值。

4.分析靈敏度

用試劑測試同型半胱氨酸已知濃度在（5—15）μmol/L的樣本，記錄在試劑規(guī)定參數(shù)下的吸光度差值。

（1）對于終點法測試的試劑，10.0μmol/L樣本的吸光度變化（ΔA）應(yīng)不小于0.02。

（2）對于速率法測試的試劑，10.0μmol/L樣本的吸光度變化率（ΔA/min）應(yīng)不小于0.01。

5.重復(fù)性

測量批內(nèi)精密度的評估應(yīng)包括兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)，通常選用該檢測指標(biāo)的參考區(qū)間附近和異常樣本，建議采用人源樣本或與人源樣本基質(zhì)接近的樣本進行試驗。選擇重復(fù)測試濃度為（10.0±2.0）μmol/L的樣本，所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于5%，（20.0±4.0）μmol/L的樣本，所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于3%。

6.批間差

用3個不同批號的試劑分別測試（10.0±2.0）μmol/L的樣本，每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值，計算相對極差。

7.線性

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度達到預(yù)期測定上限的混合人血清（或其他人源樣本），制備低濃度樣本時應(yīng)充分考慮稀釋對樣本基質(zhì)的影響，建議稀釋液盡量采用陰性血清。建立線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7—11個濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)試驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點（最終不得少于7個水平）直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。驗證線性范圍時可選擇5—7個濃度水平。

超出線性范圍的樣本如需稀釋后測定，應(yīng)做相關(guān)研究，明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數(shù)，研究過程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)影響，必要時應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。

8.干擾試驗

考察樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯；同時根據(jù)不同檢驗原理選擇特異性干擾物質(zhì)（如血氨、S-腺苷蛋氨酸、抗壞血酸、谷胱甘肽等）進行檢測。干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。方法為對模擬添加干擾物的樣本分別進行驗證，樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義，說明樣本的制備方法及干擾試驗的評價標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。待評價同型半胱氨酸樣本濃度應(yīng)至少包含臨近醫(yī)學(xué)決定水平（或正常參考區(qū)間上限）。

藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。

9.校準(zhǔn)品、質(zhì)控品賦值（如適用）

（1）應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品賦值及不確定度計算記錄，提供質(zhì)控品定值及其靶值范圍確定的記錄。

（2）均一性

取同批號的一定數(shù)量最小包裝單元的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，每包裝單元測試1次，按下面的公式計算測試結(jié)果的平均值（x1）和標(biāo)準(zhǔn)差S1；另用一個上述校準(zhǔn)品最小包裝單元連續(xù)測試相同次數(shù)，計算測試結(jié)果的平均值（x2）和標(biāo)準(zhǔn)差S2；按下列各公式計算瓶間重復(fù)性CV%，所有參數(shù)的瓶間重復(fù)性結(jié)果均應(yīng)符合要求。

10.其他需注意問題

對于適用多個機型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機型】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。

如有多個包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證，如不同包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品的分析性能評估。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

試劑盒的樣本類型如包括血清和血漿樣本，則應(yīng)對二者進行相關(guān)性研究以確認(rèn)二者檢測結(jié)果是否完全一致或存在某種相關(guān)性（如系數(shù)關(guān)系）。對于血漿樣本，申請人應(yīng)對不同的抗凝劑進行研究以確認(rèn)最適的抗凝條件以及是否會干擾檢測結(jié)果。

（五）參考區(qū)間確定資料

應(yīng)提交驗證參考區(qū)間所采用樣本來源、詳細的試驗資料、統(tǒng)計方法等。

應(yīng)明確參考人群的納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，研究表明同型半胱氨酸與性別、年齡具有一定相關(guān)性，建議廠家根據(jù)臨床需要，必要時對不同性別、不同年齡（或選擇特定年齡段）進行考察，研究例數(shù)均應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。

若引用針對中國人群參考區(qū)間研究的相關(guān)文獻，應(yīng)明確說明出處，并進行驗證。研究結(jié)果應(yīng)在說明書【參考區(qū)間】項中進行相應(yīng)說明。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究主要包括效期穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性等，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過程。對于效期穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，應(yīng)提供相應(yīng)穩(wěn)定性試驗研究資料。

應(yīng)對樣本在不同儲存條件下的穩(wěn)定性期限進行研究，并在說明書中樣本要求處明示。（注：若有相關(guān)文獻中已明確說明，亦可作為依據(jù)。）

（七）臨床評價資料

臨床試驗資料應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。下面僅對臨床試驗中的基本問題進行闡述。

1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能不低于擬申報產(chǎn)品的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進行比較研究試驗，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床研究單位的選擇

應(yīng)在至少兩家經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局備案的臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗，臨床研究單位試驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個試驗中，考核試劑和對比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.倫理要求

臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗機構(gòu)倫理委員會的同意。研究者應(yīng)考慮臨床試驗用樣本，如血清、血漿等的獲得或試驗結(jié)果對受試者的風(fēng)險性，應(yīng)提交倫理委員會的審查意見及受試者的知情同意書。對于例外情況，如客觀上不可能獲得受試者的知情同意或該臨床試驗對受試者幾乎沒有風(fēng)險，可經(jīng)倫理委員會審查和批準(zhǔn)后免于受試者的知情同意。

4.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床試驗研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床研究機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的對比試劑應(yīng)保持一致，所用機型應(yīng)進行適用性驗證，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，考核試劑的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且不應(yīng)超越對比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了對比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)對額外的樣本類型進行驗證。

5.研究對象選擇

臨床試驗應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。申請人在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。對參考區(qū)間分組的產(chǎn)品，在進行結(jié)果統(tǒng)計分析時，應(yīng)對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。

研究總體樣本數(shù)不少于200例，并覆蓋線性范圍，應(yīng)充分考慮對病理值樣本的驗證，異常值樣本數(shù)建議不少于80例。如參考區(qū)間按年齡或性別分段，建議每一組段樣本數(shù)量應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。

樣本應(yīng)明確抗凝劑的要求、存貯條件、可否凍融等及避免使用的樣本。試驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。

如果聲稱同時適用于血清和血漿樣本，那么血清（或血漿）的試驗例數(shù)參照上述要求，并采用考核試劑同時驗證其中至少100例受試者的自身血清、血漿樣本測試結(jié)果間的一致性，也可采取與對比試劑進行對比試驗驗證血漿（或血清）樣本測試結(jié)果間的一致性。其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。

如產(chǎn)品發(fā)生涉及檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床樣本總數(shù)至少為100例，并在至少兩家臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗；變更主要原材料的供應(yīng)商、參考區(qū)間的變化及增加臨床適應(yīng)證等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

6.統(tǒng)計學(xué)分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布等情況，建議統(tǒng)計學(xué)負責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。如相關(guān)分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析、配對t檢驗等?？己嗽噭┖蛯Ρ仍噭﹥山M檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計的檢驗水準(zhǔn)及檢驗的假設(shè)，即評價考核試劑與對比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

如試劑盒同時適用于血清和血漿樣本，可采用如相關(guān)分析、線性回歸、配對t檢驗等統(tǒng)計學(xué)方法來評價血漿和血清樣本測試結(jié)果間的一致性。

7.臨床試驗總結(jié)報告撰寫

根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。

（1）臨床試驗總體設(shè)計及方案描述

①臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

②病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。

③樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

④統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

（2）具體的臨床試驗情況

①考核試劑和對比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。

②對各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

③質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估。

④具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。

（3）統(tǒng)計學(xué)分析

①數(shù)據(jù)預(yù)處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

②定量值相關(guān)性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和r、R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是對比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，r是相關(guān)系數(shù)（要求r＞0.975），如r＜0.975，應(yīng)適當(dāng)擴大樣本量以擴大數(shù)據(jù)范圍，R2是判定系數(shù)（通常要求R2≥0.95），計算回歸系數(shù)及截距的95%可信區(qū)間。

分別計算醫(yī)學(xué)決定水平處（或正常參考區(qū)間上限）相對偏倚/偏差及95%置信區(qū)間。醫(yī)學(xué)決定水平處（或正常參考區(qū)間上限）相對偏倚應(yīng)不大于允許誤差（建議參照1/2CLIA’88、1/2室間質(zhì)評可接受范圍、1/2來源于生物變異的總允許誤差、衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)要求設(shè)定允許誤差）。

應(yīng)給出考核試劑與對比試劑之間的差值（絕對偏倚/偏差）或比值（相對偏倚/偏差）散點圖，觀察并分析各點的偏倚分布情況。

通過相關(guān)性分析、配對t檢驗等統(tǒng)計分析方法綜合評價考核試劑與對比試劑等效性。

（4）討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料

申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進行風(fēng)險分析，應(yīng)符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。

作為定量檢測試劑，應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、裝量、試劑空白、分析靈敏度、線性、精密度、準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性等。各性能指標(biāo)應(yīng)不低于YY/T 1258—2015《同型半胱氨酸檢測試劑（盒）（酶循環(huán)法）》的要求，如有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布或更新，則產(chǎn)品技術(shù)要求不得低于其相關(guān)要求。此外，可根據(jù)實際情況增加下列檢驗項目：

（1）試劑空白吸光度變化率（如適用）

用試劑測試空白樣本，記錄在試劑參數(shù)規(guī)定讀數(shù)點下的吸光度差值（ΔA），計算空白樣本的吸光度變化率（ΔA/min）應(yīng)不大于企業(yè)規(guī)定值。

（2）準(zhǔn)確度（方法學(xué)比對）

用待測試劑盒與申請人選定分析系統(tǒng)（參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑）分別檢測不少于40個在檢測范圍內(nèi)的人源樣品，回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，計算相關(guān)系數(shù)r應(yīng)大于等于0.975，醫(yī)學(xué)決定水平處（或正常參考區(qū)間上限）相對偏倚應(yīng)不大于企業(yè)規(guī)定值。

（3）復(fù)溶穩(wěn)定性（干粉或凍干試劑適用）：干粉試劑開瓶后（復(fù)溶后）在規(guī)定的貯存條件下保存至有效期末，產(chǎn)品的性能應(yīng)至少符合線性范圍、準(zhǔn)確度和重復(fù)性。

（4）校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（如適用）

①溯源及賦值說明：同型半胱氨酸尚無國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，已有國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，若試劑盒配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求溯源至國家或國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并提供校準(zhǔn)品溯源性說明及質(zhì)控品賦值說明。若有國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)發(fā)布，應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進行驗證。

②性能要求：外觀、裝量、均一性（瓶間差），凍干品還包括：含水量、復(fù)溶穩(wěn)定性，液體劑型還應(yīng)包含開瓶穩(wěn)定性。如校準(zhǔn)品和定值質(zhì)控品為單獨注冊單元應(yīng)考察賦值的準(zhǔn)確性。

（5）附錄

如注冊單元中包含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，應(yīng)在附錄中明確校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的賦值程序。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告

根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應(yīng)該在國家食品藥品監(jiān)督管理部門認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行樣品的注冊檢驗。對于已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)品的檢測項目，在注冊檢驗時應(yīng)采用相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)品進行，對于目前尚無國家標(biāo)準(zhǔn)品的項目，申請人應(yīng)建立自己的質(zhì)控體系并提供相應(yīng)的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品。注冊申報資料中應(yīng)包括相應(yīng)的注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗原理、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）、《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）的要求。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標(biāo)注，并單獨列明參考文獻的相關(guān)信息。

結(jié)合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，下面對同型半胱氨酸測定試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

產(chǎn)品說明書內(nèi)容原則上應(yīng)全部用中文進行表述；如含有國際通用或行業(yè)內(nèi)普遍認(rèn)可的英文縮寫，可用括號在中文后標(biāo)明；對于確實無適當(dāng)中文表述的詞語，可使用相應(yīng)英文或其縮寫。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)包括以下幾部分內(nèi)容：

（1）說明試劑用于體外定量測定人血清和/或血漿中同型半胱氨酸的濃度。

（2）與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。

2．【檢驗原理】

本指導(dǎo)原則適用于使用酶循環(huán)法對人血清或血漿中的同型半胱氨酸進行定量測定的試劑，下面介紹該產(chǎn)品的2種反應(yīng)原理：

（1）氧化型HCY被還原成游離HCY，游離HCY在HCY-甲基轉(zhuǎn)移酶催化下與S-腺苷甲硫氨酸（SAM）反應(yīng)生成甲硫氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸（SAH），SAH被SAH-水解酶水解生成腺苷和HCY；生成的HCY進入HCY甲基轉(zhuǎn)移酶催化的轉(zhuǎn)化反應(yīng)，進行循環(huán)反應(yīng)，生成的腺苷立即脫氨轉(zhuǎn)化為次黃嘌呤和氨；氨進一步在谷氨酸脫氫酶催化下和NADH反應(yīng)，將NADH轉(zhuǎn)變?yōu)镹AD+，樣本中HCY濃度與NADH轉(zhuǎn)化速率（或量）成正比。

（2）氧化型HCY被還原成游離HCY，游離HCY在胱硫醚β-合成酶（CBS）催化下和絲氨酸反應(yīng)生成L-胱硫醚，L-胱硫醚在胱硫醚β-分解酶（CBL）催化下生成HCY、丙酮酸和NH3，生成的HCY繼續(xù)進行循環(huán)反應(yīng)，丙酮酸在乳酸脫氫酶（LDH）的催化下將NADH轉(zhuǎn)變?yōu)镹AD+，樣本中HCY濃度與NADH轉(zhuǎn)化速率（或量）成正比。

3.【主要組成成分】

（1）說明試劑包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，如果對于正確的操作很重要，應(yīng)提供其生物學(xué)來源、濃度及其他特性；明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

（2）試劑內(nèi)如包含校準(zhǔn)品和/或質(zhì)控品，應(yīng)說明其主要組成成分及其生物學(xué)來源，校準(zhǔn)品應(yīng)注明其定值及溯源性，溯源性至少應(yīng)寫明溯源到的最高級別，包括：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的發(fā)布單位及編號，質(zhì)控品應(yīng)有合適的靶值范圍，如靶值范圍有批特異性，可注明批特異性，并附單獨的靶值單。

4.【儲存條件及有效期】

（1）對試劑的效期穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等信息作詳細介紹。包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。

（2）不同組分保存條件及有效期不同時，應(yīng)分別說明，產(chǎn)品總有效期以其中效期最短的為準(zhǔn)。

注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“室溫”，應(yīng)明確貯存溫度，如2℃—8℃，有效期12個月。穩(wěn)定期限應(yīng)以月或日或小時為單位。

5.【適用儀器】

（1）說明可適用的儀器，并提供與儀器有關(guān)的必要信息以便用戶能夠做出最好的選擇。

（2）應(yīng)寫明具體適用儀器的型號，不能泛指某一系列儀器。

6.【樣本要求】

重點明確以下內(nèi)容：

（1）樣本采集：說明采集方法及樣本類型，如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。

當(dāng)血清存在脂濁、嚴(yán)重黃疸、溶血時，對本方法有干擾，應(yīng)盡可避免此類樣本。

（2）樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件及期限、運輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)。對儲存樣本的添加劑要求等。

由于紅細胞合成和釋放同型半胱氨酸的作用，導(dǎo)致血漿和血清中同型半胱氨酸的濃度升高，建議采血后置于冰浴中（或冷藏運輸），并應(yīng)及時分離出血漿（或血清）樣本。

（3）若樣本濃度超出線性范圍上限可稀釋測定的，需明確最大可稀釋倍數(shù)、稀釋溶液等信息。

7.【檢驗方法】

詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：

（1）試驗具體操作步驟。

（2）試劑配制方法、注意事項。

（3）試驗條件：溫度、時間、儀器波長等以及試驗過程中的注意事項。

（4）校準(zhǔn)：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、校準(zhǔn)曲線的繪制。應(yīng)注明推薦的校準(zhǔn)周期。

（5）質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等，如質(zhì)控不合格應(yīng)提供相關(guān)的解決方案。

8.【參考區(qū)間】

（1）應(yīng)注明常用樣本類型的參考區(qū)間，并簡要說明參考區(qū)間確定的方法。

（2）簡單介紹設(shè)定該參考區(qū)間所選健康人群的區(qū)域特征，建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。

9.【檢驗結(jié)果的解釋】

（1）說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素。

（2）說明在何種情況下需要進行確認(rèn)試驗。

10.【檢驗方法的局限性】

（1）說明檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據(jù)。

（2）說明該檢驗方法由于哪些原因會使測量結(jié)果產(chǎn)生偏離，或測量結(jié)果還不能完全滿足臨床需要。如：干擾（膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等）等。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

說明該產(chǎn)品主要性能指標(biāo)，應(yīng)至少包括：外觀、裝量、試劑空白吸光度、試劑空白吸光度變化率（如適用）、分析靈敏度、線性范圍、重復(fù)性、批間差、準(zhǔn)確度等，并對性能評估結(jié)果進行簡要總結(jié)。

12.【注意事項】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

（1）本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

（2）對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待，提示操作者采取必要的防護措施。

（3）是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響，如S-腺苷甲硫氨酸、甲氨蝶呤等。

三、審查關(guān)注點

（一）產(chǎn)品技術(shù)要求中性能指標(biāo)的設(shè)定及檢驗方法是否符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求；技術(shù)要求的格式是否符合《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。

（二）產(chǎn)品說明書的編寫內(nèi)容及格式是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，相關(guān)內(nèi)容是否符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）中對說明書的要求。

（三）分析性能評估指標(biāo)及結(jié)果是否支持產(chǎn)品技術(shù)要求的確定；是否滿足本指導(dǎo)原則中各指標(biāo)驗證的要求。

（四）參考區(qū)間確定使用的方法是否合理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計是否符合統(tǒng)計學(xué)的相關(guān)要求，結(jié)論是否和說明書聲稱一致。

（五）試劑的穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否和說明書聲稱一致。

（六）臨床試驗采用的樣本類型及病例是否滿足試劑盒聲稱的預(yù)期用途，樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。

（七）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料的撰寫是否符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

四、編寫單位

福建省食品藥品認(rèn)證審評中心。