附件：腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑注冊申報資料指導(dǎo)原則（食藥監(jiān)辦械函[2011]116號）.doc

腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑注冊申報資料指導(dǎo)原則
（食藥監(jiān)辦械函[2011]116號）

一、前言

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化，并依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時調(diào)整。

二、適用范圍

腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑是指利用各種方法學(xué)對人血清、血漿或其他體液中的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行體外定量分析的試劑。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊申報和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

從方法學(xué)考慮，本文主要指利用基于抗原抗體反應(yīng)原理的免疫學(xué)方法對腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行定量檢測的體外診斷試劑，如酶免疫法、化學(xué)發(fā)光法或微粒子酶免法等（不限于上述方法學(xué)），而不包括組織受體檢測、生物化學(xué)方法、免疫組化染色法、分子生物學(xué)方法類檢測試劑，有利之處可參考執(zhí)行。

三、基本要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）和《體外診斷試劑注冊申報資料基本要求》（國食藥監(jiān)械〔2007〕609號）的相關(guān)要求，下面著重介紹與腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑預(yù)期用途有關(guān)的臨床背景情況。

理想的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)具有以下特性：靈敏度高，便于腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)；特異性好，便于良、惡性腫瘤的鑒別；良好的器官特異性；與病情嚴(yán)重程度、腫瘤大小或分期有直接關(guān)系；監(jiān)測治療效果，腫瘤標(biāo)志物濃度增高或降低與治療效果相關(guān)；預(yù)測復(fù)發(fā)，疾病復(fù)發(fā)時腫瘤標(biāo)志物水平明顯異常。但至今尚沒有一種腫瘤標(biāo)志物能完全滿足上述要求。目前，臨床常用腫瘤標(biāo)志物在用于惡性腫瘤的臨床診治時,靈敏度和特異性都不高，絕大多數(shù)腫瘤標(biāo)志物的濃度高低與腫瘤的大小、生長、惡性程度以及分級/分期有一定關(guān)聯(lián)但尚不能作為早期診斷或確診的依據(jù)。

腫瘤標(biāo)志物主要用于惡性腫瘤患者病情的動態(tài)監(jiān)測，不能作為早期診斷或確診依據(jù)，尚無足夠證據(jù)證明其可用于普通人群的腫瘤篩查。其濃度逐漸升高常意味著疾病處于不斷進(jìn)展期或療效不佳，濃度降低則意味著對治療有反應(yīng)或療效較好，而穩(wěn)定的抗原水平則常常暗示疾病處于穩(wěn)定期。動態(tài)監(jiān)測的另一目的是判斷殘留病灶、預(yù)測復(fù)發(fā)，腫瘤標(biāo)志物濃度持續(xù)低水平地高于正常意味著可能有殘留病灶的存在，而短期內(nèi)迅速升高則往往是疾病復(fù)發(fā)的前兆。由于目前應(yīng)用的腫瘤標(biāo)志物不能完全區(qū)分良惡性疾病，即使?jié)舛鹊陀谡⒖贾狄膊⒉荒芘懦龕盒约膊〉目赡苄裕谠S多良性疾病卻可見這些標(biāo)記物濃度水平的升高，故在對惡性腫瘤患者的臨床診治中，應(yīng)結(jié)合患者的癥狀/體征、其他實(shí)驗(yàn)室檢測以及治療情況等綜合考慮。

（二）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗(yàn)方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

（1）說明試劑盒用于定量檢測血清、血漿和/或其他體液中的某腫瘤標(biāo)志物濃度；

（2）簡單介紹該腫瘤標(biāo)志物的特征，如分子結(jié)構(gòu)、分子量、產(chǎn)生和代謝主要途徑、半衰期等；

（3）腫瘤標(biāo)志物水平升高常見于哪些良惡性疾病，組織/器官特異性如何，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學(xué)解釋；

（4）強(qiáng)調(diào)：主要用于對惡性腫瘤患者進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測以輔助判斷疾病進(jìn)程或治療效果，不能作為惡性腫瘤早期診斷或確診的依據(jù)，不宜用于普通人群的腫瘤篩查。

2.【主要組成成分】

（1）說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，如果對于正確的操作很重要，應(yīng)提供其生物學(xué)來源、活性及其他特性；明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

（2）試劑盒內(nèi)如包含校準(zhǔn)品和/或質(zhì)控品，應(yīng)說明其主要組成成分及其生物學(xué)來源，校準(zhǔn)品應(yīng)注明其定值及溯源性，質(zhì)控品應(yīng)有合適的靶值范圍。

（3）試劑盒中不包含但對該項(xiàng)檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、貨號及其他相關(guān)信息。

3.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限、保存條件（短期、長期）、運(yùn)輸條件等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)。應(yīng)詳細(xì)描述對特殊體液標(biāo)本的采集條件、保存液、容器等可能影響檢測結(jié)果的要求。

4.【適用機(jī)型】注明所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

5.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個步驟，包括：

（1）試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

（2）試驗(yàn)條件：溫度、時間、儀器波長等以及試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)。

（3）校準(zhǔn)：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制。對需專用儀器的產(chǎn)品，應(yīng)注明推薦的儀器校準(zhǔn)周期。

（4）質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測報告。如質(zhì)控不合格應(yīng)提供相關(guān)的解決方案。

6.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：

（1）最低檢出限（分析靈敏度）：說明試劑的最低檢出濃度或不高于某濃度水平，簡單介紹確定方法，對功能靈敏度如有研究可一并注明。

（2）檢測范圍：本試劑盒可達(dá)到的線性范圍、檢測范圍或可報告范圍，儀器報告結(jié)果的高限和低限要求（如有）等。

（3）精密度：簡要說明精密度評價的方法，建議以列表的方式列出批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、運(yùn)行內(nèi)/運(yùn)行間精密度等信息，以標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）的形式表示。

（4）特異性：有關(guān)干擾或交叉反應(yīng)的研究。常見的特異性研究包括：對溶血、高脂、黃疸等干擾因子研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重等模糊表述），有關(guān)自身抗體、易共存或結(jié)構(gòu)相似的不同腫瘤標(biāo)志物間、抗腫瘤藥物特異性（如某些生物制劑）的研究，如未進(jìn)行相關(guān)研究也應(yīng)提供相關(guān)警示說明。

（5）Hook（鉤狀）效應(yīng)：說明不會產(chǎn)生Hook效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋，應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。

（6）對比試驗(yàn)研究（如有）：簡要介紹參比試劑的信息、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法等，對比結(jié)果可以回歸方程、判定系數(shù)的形式表示。

（7）建議采用國際標(biāo)準(zhǔn)濃度單位表示腫瘤標(biāo)志物濃度，如涉及不同單位，如U/ml、ng/ml、mg/l等，應(yīng)注明不同單位間的換算關(guān)系。

7.【參考值（范圍）】

應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考值（范圍），簡單介紹設(shè)定該參考值（范圍）所選健康人群的區(qū)域特征，建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考值（范圍）”。

8.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

（1）本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

（2）由于方法學(xué)或抗體特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進(jìn)行腫瘤標(biāo)記物檢測可能會得到不同的檢測結(jié)果，因此，在腫瘤監(jiān)測過程中，用不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中如果改變試劑類型，則應(yīng)進(jìn)行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定基線值。

（3）有關(guān)人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項(xiàng)目的檢測，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

（4）樣本：采集時間要求、與用藥的先后順序或用藥后時間間隔等；對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。

（5）其他有關(guān)不同腫瘤標(biāo)志物特性的注意事項(xiàng)。

（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明

擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊申報資料基本要求》的相關(guān)規(guī)定。另外，對于國產(chǎn)第三類體外診斷試劑產(chǎn)品，應(yīng)參考《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），將擬申報產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類”項(xiàng)中引出該附錄內(nèi)容。

作為定量檢測試劑，腫瘤標(biāo)志物產(chǎn)品的注冊檢測應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：準(zhǔn)確度、精密度、最低檢測限（分析靈敏度）、線性范圍等。如果擬申報試劑屬于《中國生物制品規(guī)程》（2000年版）收錄的項(xiàng)目或已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。

（四）注冊檢測

根據(jù)《辦法》要求，首次申請注冊的第三類產(chǎn)品應(yīng)該在國家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢測。對于已經(jīng)有國家標(biāo)準(zhǔn)品的腫瘤標(biāo)志物項(xiàng)目，在注冊檢測時應(yīng)采用相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行,對于目前尚無國家標(biāo)準(zhǔn)品的項(xiàng)目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立自己的標(biāo)準(zhǔn)體系并提供相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品。

（五）主要原材料研究資料

主要原材料（包括抗原、抗體及其他主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證研究資料；質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的原料選擇、制備、定值過程及試驗(yàn)資料；校準(zhǔn)品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實(shí)驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。

（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示；

2.反應(yīng)原理（如雙抗體夾心法）介紹；

3.固相載體、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹；

4.確定抗原抗體反應(yīng)條件（溫度、時間、pH值等）的研究資料；

5.確定反應(yīng)所需物質(zhì)用量（校準(zhǔn)品、樣本、包被物、酶標(biāo)物、底物等）的研究資料；

6.酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究；

7.其他：如清洗次數(shù)、基質(zhì)液的選擇、樣本稀釋等；

8.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（七）分析性能評估資料

企業(yè)應(yīng)提交原廠在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體研究方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。對于腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑，建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究。

1.準(zhǔn)確度

對測量準(zhǔn)確度的評價依次包括：與國家標(biāo)準(zhǔn)品（和/或國際標(biāo)準(zhǔn)品）的偏差分析、回收實(shí)驗(yàn)、方法學(xué)比對等方法，企業(yè)可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。

（1）與國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品的比對研究

如果研究項(xiàng)目有相應(yīng)國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品，則使用國家（國際）標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行驗(yàn)證，重點(diǎn)觀察對相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果的偏差情況。

（2）回收試驗(yàn)

用于評估定量檢測方法準(zhǔn)確測定加入純分析物的能力，結(jié)果用回收率表示。通常對樣本進(jìn)行2-3次回收試驗(yàn)，取平均值即平均回收率。

回收試驗(yàn)注意事項(xiàng)：

①加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積一般應(yīng)小于樣本體積的10%；

②盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測物濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平；

③標(biāo)準(zhǔn)物濃度應(yīng)該足夠高，以得到不同濃度的回收樣本；

④注意基質(zhì)效應(yīng)，盡量采用與臨床待測樣本接近的基質(zhì)。

（3）方法學(xué)比對

采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品，從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。

在實(shí)施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對試驗(yàn)。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2.精密度

測量精密度的評估應(yīng)至少包括兩個濃度水平的樣本進(jìn)行，兩個濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義（醫(yī)學(xué)決定水平），通常選用該檢測指標(biāo)的正常參考值（范圍）附近和異常高值樣本。兩個濃度都選用高值樣品，可能致CV偏小，也不能選用接近最低檢出限的樣品，可能致CV偏大，而且絕大多數(shù)腫瘤標(biāo)志物的極低值并無實(shí)際臨床意義。

測量精密度的評價方法并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同的試劑特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的CLSI-EP文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進(jìn)行。

3.線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7-11個濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。

4.最低檢測限（分析靈敏度）

最低檢測限的確定常使用同批號試劑對零濃度校準(zhǔn)品（或樣品稀釋液）進(jìn)行至少20次重復(fù)檢測，平均值加（或減）2倍SD（≥95%置信區(qū)間）即試劑的最低檢測限。

5.特異性

（1）溶血（血紅蛋白）、高脂、高膽紅素等干擾因素對檢測結(jié)果的影響及相關(guān)干擾因子的高限值。

（2）自身抗體影響，如RF、ANA等。

（3）樣本中存在的某些與待測抗原有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)或抗原表位的分子，可能與試劑中的單克隆抗體發(fā)生交叉反應(yīng)而影響檢測結(jié)果，如易共存的其他腫瘤標(biāo)志物抗原、某些激素、近期使用的抗腫瘤藥物、人抗鼠抗體（HAMA）等。

6.高濃度Hook效應(yīng)及樣本稀釋

Hook效應(yīng)通常指在雙抗體夾心實(shí)驗(yàn)中，由于標(biāo)本中受檢抗原的含量過高，過量抗原分別與固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成“夾心復(fù)合物”，從而影響檢測結(jié)果，將高濃度錯誤報告為低濃度，出現(xiàn)高濃度后帶現(xiàn)象，又稱“鉤狀效應(yīng)”，在一步法操作更常見。

企業(yè)應(yīng)對一些極高值樣本進(jìn)行相關(guān)研究，以驗(yàn)證產(chǎn)生Hook效應(yīng)的高限值。過度稀釋可能產(chǎn)生明顯的基質(zhì)效應(yīng)，企業(yè)應(yīng)對樣本稀釋液、合理的稀釋比例做相關(guān)研究以確認(rèn)最佳稀釋條件。

7.其他需注意問題

對于適用多個機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機(jī)型】項(xiàng)中所列的所有型號儀器的性能評估資料。

試劑盒的樣本類型如包括血清和血漿樣本，則應(yīng)對二者進(jìn)行相關(guān)性研究以確認(rèn)二者檢測結(jié)果是否完全一致或存在某種相關(guān)性（如系數(shù)關(guān)系）。對于血漿樣本，企業(yè)應(yīng)對不同的抗凝劑進(jìn)行研究以確認(rèn)最適的抗凝條件以及是否會干擾檢測結(jié)果。

（八）參考值（范圍）確定資料

參考值（范圍）確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細(xì)的試驗(yàn)資料。建議采用受試者工作特征（ROC）曲線方法確定擬申報腫瘤標(biāo)志物的參考值（范圍）。

（九）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究主要包括實(shí)時穩(wěn)定性、高溫加速破壞穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、上機(jī)穩(wěn)定性及開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性等，企業(yè)可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過程。對于實(shí)時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

（十）臨床試驗(yàn)研究

1.研究方法

（1）已有同類產(chǎn)品上市的臨床研究

選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行對比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學(xué)相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為參比試劑。

（2）新腫瘤標(biāo)志物檢測試劑的臨床研究

對于無法選擇參比試劑的新腫瘤標(biāo)記物而言，其臨床研究應(yīng)選擇多個相關(guān)的良惡性疾病組及部分正常人群，驗(yàn)證新標(biāo)記物的臨床靈敏度和特異性，并利用ROC曲線確定合適的參考值（范圍）。另外，還應(yīng)對至少100例特定的惡性腫瘤患者進(jìn)行治療前后的隨訪監(jiān)測研究，以驗(yàn)證新腫瘤標(biāo)記物濃度變化與患者病情變化的相關(guān)性。臨床隨訪監(jiān)測研究應(yīng)結(jié)合臨床治療措施的選擇（公認(rèn)有效的治療手段）、患者治療后恢復(fù)狀況、腫瘤標(biāo)志物代謝周期（半衰期）等因素綜合考慮?；颊卟蓸拥臅r間點(diǎn)視臨床需要而定，申請人不得隨意干涉。

2.臨床研究單位的選擇

建議在國內(nèi)不同城市選擇臨床單位，盡量使各單位的臨床樣本有一定地域代表性；臨床研究單位應(yīng)具有腫瘤疾病診療的優(yōu)勢，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實(shí)驗(yàn)中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動。整個試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。對于新試劑的動態(tài)監(jiān)測研究，應(yīng)在方案中明確前后兩次濃度變化有臨床意義的標(biāo)準(zhǔn)。臨床試驗(yàn)中所涉及的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說明書一致，且每種樣本類型例數(shù)的選擇應(yīng)符合基本的統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。各研究單位選用的參比試劑及所用機(jī)型應(yīng)完全一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

4.臨床病例選擇

如上文所述，絕大多數(shù)腫瘤標(biāo)志物對于惡性腫瘤診斷的靈敏度和特異性較低，器官定位及對疾病良惡性的區(qū)分能力都較差。因此，在進(jìn)行臨床研究時，除選擇目的器官/組織惡性疾病的病例外，還應(yīng)選擇其他器官/組織的惡性病患者、相關(guān)的良性病例等。另外，孕婦或處于生理周期女性亦可見某些激素或胚胎蛋白類腫瘤標(biāo)志物的水平升高，對于此類腫瘤標(biāo)志物，臨床研究中應(yīng)選擇部分相關(guān)樣本作為受試對象。

臨床研究應(yīng)包括對部分來自正常健康人群的樣本作為正常對照。比較正常組和疾病組結(jié)果，以便對申報產(chǎn)品的臨床性能做出全面分析。建議對健康人群例數(shù)的選擇以不超過150例為宜。對于新的腫瘤標(biāo)志物或臨床意義有待進(jìn)一步明確的項(xiàng)目，應(yīng)提供足夠臨床證據(jù)證明其臨床預(yù)期用途。不管是健康人群或不同病種的患者，每一組受試者的最小入選人數(shù)均須滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的基本要求。

另外，建議在臨床試驗(yàn)中選擇部分含干擾物質(zhì)的標(biāo)本進(jìn)行對比研究，包括高脂、溶血、黃疸的樣本，RF、ANA陽性樣本，易共存的其他腫瘤標(biāo)志物抗原同時升高的患者標(biāo)本，以從臨床角度驗(yàn)證試劑的特異性。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如相關(guān)分析、線性回歸、受試者工作特征（ROC）曲線分析、陰/陽性符合率等。對于對比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，最常用是對考核試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點(diǎn)觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R²;）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。結(jié)合臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計(jì)學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異的樣本，應(yīng)采用臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。

7.臨床試驗(yàn)總結(jié)報告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗(yàn)報告應(yīng)該對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

（1）臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

①臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

②病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同病種的預(yù)期選擇例數(shù)及健康人群的選擇標(biāo)準(zhǔn)；

③樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

④統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評價統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

（2）具體的臨床試驗(yàn)情況

①考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機(jī)型等信息；

②對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；

③質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估；

④具體試驗(yàn)過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。

（3）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

①數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

②定性結(jié)果的一致性分析

陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區(qū)間。以交叉表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，對定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。

③定量值相關(guān)性和一致性分析

用回歸分析驗(yàn)證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R²的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R²是判定系數(shù)，同時應(yīng)給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結(jié)果應(yīng)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

另外考慮到在不同的樣本濃度區(qū)間試劑的性能可能存在一定差異，因此，建議對總體濃度范圍進(jìn)行區(qū)間分層統(tǒng)計(jì)，對不同濃度區(qū)間內(nèi)的結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析以更好的驗(yàn)證兩種試劑的相關(guān)性。

對新腫瘤標(biāo)志物系列監(jiān)測研究，建議按照患者治療后病情狀況進(jìn)行逐級分組，并確定分組的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，對各組數(shù)據(jù)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，判斷被觀察腫瘤標(biāo)志物的濃度隨疾病狀況的變化情況。

（4）討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗(yàn)結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

四、名詞解釋

1.腫瘤標(biāo)志物（TumorMarker）：是指在惡性腫瘤發(fā)生和增殖過程中,由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生或機(jī)體反應(yīng)而異常產(chǎn)生和/或升高的，反映腫瘤細(xì)胞特性的一類物質(zhì)。

2.準(zhǔn)確度（accuracy）：一個測量值與可接受的參考值間的一致程度。

3.最低檢測限/分析靈敏度（Lowerdetectionlimit）：樣品中以一定概率可被聲明與零有差異的被測量的最低值。本指導(dǎo)原則中的最低檢測限為區(qū)別于零的不低于95%可信區(qū)間的最低濃度。

4.分析特異性（analyticalSpecificity）：測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度。（潛在干擾物包括干擾物和交叉反應(yīng)物）

5.線性（linearity）：在給定測量范圍內(nèi)，給出的測量結(jié)果與樣品中實(shí)際存在的被測量物的值成比例的能力。線性是描述一個測量系統(tǒng)的測量示值或測量結(jié)果相關(guān)于樣本的賦值符合直線的屬性。

6.精密度（precision）：在規(guī)定條件下，相互獨(dú)立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的測量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

五、參考文獻(xiàn)：

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2.《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)械[2007]240號）

3.《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國食藥監(jiān)械[2007]240號）

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6.馮仁豐，《臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)》（第二版），上海科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社

7.《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社