附件：流式細胞儀配套用檢測試劑（第一、二類）注冊審查指導原則 （2024年修訂版）（2024年第19號）.doc

流式細胞儀配套用檢測試劑（第一、二類）注冊審查指導原則（2024年修訂版）

本指導原則旨在指導注冊申請人對流式細胞儀配套用檢測試劑（第一、二類）注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門提供參考。

本指導原則是對流式細胞儀配套用檢測試劑（第一、二類）的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導原則是供注冊申請人和技術審評人員使用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導原則中“流式細胞儀配套用檢測試劑”是指標記有熒光類物質(zhì)（如熒光素、量子點等）、針對各類血細胞或組織細胞分化抗原的抗體試劑以及相關的質(zhì)控品和校準品，這些抗體與血細胞或組織細胞的各類抗原分子特異性結(jié)合，與相應流式細胞儀配套使用，對人血液、骨髓液、其他體液或組織標本中的被標記細胞或分子進行分類和計數(shù)。由于多方面差異，本文內(nèi)容將不包括預期用途為利用流式細胞術進行特異性目的細胞分選的檢測試劑。流式細胞分析介紹詳見附件。

本指導原則適用于第一、二類流式細胞儀配套用檢測試劑產(chǎn)品，其中第一類產(chǎn)品的備案資料根據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》《國家藥監(jiān)局關于第一類醫(yī)療器械備案有關事項的公告》的要求采用本指導原則適用內(nèi)容。

二、注冊審查要點

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱

試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。單色試劑通用名稱建議采取以下命名方式：被檢標志物名稱+檢測試劑（盒）（流式細胞儀法-熒光素）。多色試劑的命名可以結(jié)合靶抗原、目標細胞或組織、熒光素及臨床預期用途等信息綜合進行判斷，可采用如下命名方式：被檢標志物名稱1、2、3+檢測試劑（盒）（流式細胞儀法-熒光素），如有其它情形應詳細描述命名確定依據(jù)。

2.分類依據(jù)

根據(jù)《體外診斷試劑分類子目錄》和《體外診斷試劑分類規(guī)則》規(guī)定按照第一、二類管理的流式細胞儀配套用體外診斷試劑。分類編碼為6840。

3.注冊單元劃分

應符合《醫(yī)療器械注冊單元劃分指導原則》中體外診斷試劑注冊單元劃分相關要求。

4.產(chǎn)品列表

以表格形式列出擬申報產(chǎn)品的包裝規(guī)格、主要組成成分，以及每個包裝規(guī)格的標識（如貨號、器械唯一標識等）和描述說明。

5.既往溝通記錄

在產(chǎn)品申報前，如果申請人與監(jiān)管機構針對申報產(chǎn)品以會議形式進行了溝通，或者申報產(chǎn)品與既往注冊申報相關。應提交相關溝通記錄。

6.主文檔授權信

如適用，注冊申請人應當對主文檔引用的情況進行說明。注冊申請人應當提交由主文檔所有者或其備案代理機構出具的授權申請人引用主文檔信息的授權信。授權信中應當包括引用主文檔的申請人信息、產(chǎn)品名稱、已備案的主文檔編號、授權引用的主文檔頁碼/章節(jié)信息等內(nèi)容。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預期用途、申報產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。其中，產(chǎn)品描述中應詳述檢測原理、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價、與同類和/或前代產(chǎn)品的比較等。內(nèi)容應符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》的相關要求。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品風險管理資料

風險管理資料應符合GB/T 42062《醫(yī)療器械 風險管理對醫(yī)療器械的應用》的要求。申請人應考慮產(chǎn)品生命周期的各個環(huán)節(jié)，從產(chǎn)品設計開發(fā)、原材料的采購控制、生產(chǎn)、預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關的特征、已知和可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析。申請人應根據(jù)產(chǎn)品的實際情況充分考慮影響檢測結(jié)果的各種因素，并采用合理的控制措施，綜合評估風險是否可接受，形成風險管理資料。

風險分析應包含但不僅限于以下方面的內(nèi)容：

預期用途錯誤包括：設計開始時未設定預期分析物、未作適用機型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。

性能特征失效包括：精密度失效、準確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定量失效、量值溯源失效、校準失效。

不正確的結(jié)果包括：配方錯誤、采購的原料未能達到設計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應體系不正確、試劑與包裝材料不相容。

可能的使用錯誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標準操作，裝配過程組份、標簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運輸不當，客戶未參照產(chǎn)品說明書設置參數(shù)或使用。

與安全性有關的特征包括：有毒化學試劑的化學污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

2.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單

說明產(chǎn)品符合《體外診斷試劑安全和性能基本原則清單》各項適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。對于其中不適用的各項要求，應當說明理由。

對于包含在產(chǎn)品注冊申報資料中的文件，應當說明其在申報資料中的具體位置；對于未包含在產(chǎn)品注冊申報資料中的文件，應當注明該證據(jù)文件名稱及其在質(zhì)量管理體系文件中的編號備查。

3.產(chǎn)品技術要求

產(chǎn)品技術要求應符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則》的相關規(guī)定。

該類產(chǎn)品的技術要求主要包括：準確度、線性、精密度、染色穩(wěn)定性等相關指標，具體要求的設置應參考相關的國家/行業(yè)標準（如有）執(zhí)行，建議產(chǎn)品技術要求不低于國家/行業(yè)標準要求。

如注冊單元中包含校準品和/或質(zhì)控品，至少包含校準品的正確度、均勻性等，質(zhì)控品的預期結(jié)果、均勻性等。

4.產(chǎn)品檢驗報告

應提交按產(chǎn)品技術要求進行檢驗的檢驗報告，可以是申請人的自檢報告，也可以是委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗機構出具的檢驗報告。如產(chǎn)品提交自檢報告，還需按照《醫(yī)療器械注冊自檢管理規(guī)定》的要求提交相應資料。檢驗用產(chǎn)品應當能夠代表申請注冊產(chǎn)品的安全性和有效性，其生產(chǎn)應當符合醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的相關要求。有適用的國家標準品的，應當使用國家標準品對產(chǎn)品進行檢驗。

5.分析性能評估資料

申請人應提交在有效質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的試劑的所有性能驗證的研究資料，分析性能評估應包括但不限于樣本穩(wěn)定性、適用的樣本類型、校準品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值、準確度、精密度、空白限、檢出限及定量限（如適用）、分析特異性、線性范圍等項目，應當采用多批產(chǎn)品進行分析性能評估。

對于每項分析性能的評估，都應包括具體研究目的、試驗方法、原始數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析過程及結(jié)果。相關基本信息也應在申報資料中進行描述，包括試驗地點，試驗采用的具體試劑、校準品和質(zhì)控品的名稱、規(guī)格和批號，儀器名稱和型號，樣本類型、來源、處理方法、基質(zhì)類型及所含物質(zhì)信息等。對用于多色流式細胞分析的試劑（如CD3/CD4/CD8淋巴細胞亞群檢測試劑），其待測每個指標（如CD3、CD4和CD8三個指標）及主要組合形式的所有分析性能均應分別進行相關的驗證。分析性能評估的試驗方法可以參考國內(nèi)或國外有關體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。

如申報產(chǎn)品適用不同的機型，需要提交在不同機型上進行評估的資料。應采用一個或多個機型，進行充分的試劑分析性能建立研究，對于其他機型，應分析各適用機型的工作原理、檢測方法、反應條件控制、信號處理等，如基本相同，可基于風險分析對已建立的分析性能指標進行合理驗證。所有適用機型驗證的分析性能應基本一致，如不同機型對某一檢測項目的某一分析性能存在差異，應針對該差異采用不同機型進行充分的分析性能建立研究。

如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格進行分析或驗證。如不同規(guī)格間存在性能差異，需采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行分析性能評估；如不同規(guī)格間不存在性能差異，需要詳細說明各規(guī)格間的差別及可能產(chǎn)生的影響，采用具有代表性的包裝規(guī)格進行分析性能評估。

5.1樣本穩(wěn)定性

應充分考慮實際使用過程中樣本采集、處理、運輸及保存等各個階段的條件，對不同類型樣本的穩(wěn)定性分別進行評價并提交研究資料。內(nèi)容包括建議的保存條件、添加劑（如抗凝劑）和運輸條件（如涉及）等。

樣本穩(wěn)定性主要考慮染色前和染色后穩(wěn)定性，前者是指樣本采集后至染色（標記）前的穩(wěn)定性，后者是指染色（標記）后到上機分析前的穩(wěn)定性。樣本染色前、染色后穩(wěn)定性需結(jié)合試劑的穩(wěn)定性研究綜合進行考慮，建議在試劑實時（效期）穩(wěn)定性的終止日期后開展樣本穩(wěn)定性的研究，這樣可以代表最差條件的穩(wěn)定性。可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇多個時間點，每間隔一定的時間段對采集樣本或標記后樣本進行陽性細胞比例（或絕對數(shù)）和/或熒光強度變化率（以熒光強度報告結(jié)果時）的分析驗證，從而確認樣本染色前和染色后的合理保存條件和有效期。

5.2適用的樣本類型

應對適用的樣本類型及添加劑進行適用性確認。如果選擇具有代表性的樣本類型代替其他可比的樣本類型進行分析性能評估，應說明原因并提供證據(jù)支持。

應以列表形式說明各項分析性能評估中使用的樣本類型及其來源。

5.3校準品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值

應明確申報產(chǎn)品適用的校準品和質(zhì)控品。

如申報產(chǎn)品包括校準品，應當提交詳細的溯源資料。

如申報產(chǎn)品包括質(zhì)控品，應當提交在所有適用機型上進行賦值和驗證的資料。

5.4準確度

對測量準確度的評價主要包括：與參考物質(zhì)的偏差分析和方法學比對兩種方法，申請人可根據(jù)國際或國內(nèi)有關體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件或指導原則以及實際情況選擇合理方法進行研究。

5.4.1參考物質(zhì)的檢測及偏倚情況

使用參考物質(zhì)（包括具有互換性的有證參考物質(zhì)，公認的參考品、標準品，參考測量程序賦值的臨床樣本）進行驗證，重點觀察對相應參考物質(zhì)檢測結(jié)果的偏差情況。

5.4.2方法學比對

采用國內(nèi)/國際普遍認為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批樣品，從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對臨床樣本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。方法學比對時，申請人應嚴格執(zhí)行申報試劑和參比試劑產(chǎn)品說明書的要求，著重注意質(zhì)量控制、樣本采集及處理、試驗參數(shù)設置等事項；濃度分布范圍及可接受標準、合理的統(tǒng)計學分析等要素均應在注冊文件中予以說明。

5.5精密度

精密度是指在規(guī)定的檢測條件下，相互獨立的測試結(jié)果間的一致程度，本類試劑的精密度評價主要考慮陽性細胞的百分率（或細胞計數(shù)結(jié)果）和/或熒光強度（以熒光強度報告結(jié)果時）。建議采用多個水平的質(zhì)控物質(zhì)用于陽性細胞的百分率或細胞計數(shù)精密度的評價，各個濃度均應在試劑盒的線性范圍內(nèi)且有一定的臨床意義（醫(yī)學決定水平），通常包括該檢測指標的正常范圍、異常低值和高值樣本。申請人可根據(jù)不同情況，采用質(zhì)控品、特定細胞株、正常或異常人群樣本來做精密度評估。

對于質(zhì)控品或校準品的精密度評價，應包括其所有質(zhì)控或校準項目，如熒光信號及散射光要求等。

在進行精密度評價時，除申報試劑本身的影響外，還應對操作者、適用機型及試驗地點等要素進行相關的驗證。申請人應制定合理的精密度評價方案，例如：在每個適用機型上進行至少20天（工作日）的連續(xù)檢測，每天至少由2人完成不少于2次的完整運行，每天內(nèi)兩次運行間的時間間隔不少于3小時，從而對批內(nèi)/批間、日間、運行內(nèi)/運行間、不同操作者間的精密度以及各變量綜合的總精密度進行評價。

5.6空白限、檢出限與定量限（如適用）

應參考國際或國內(nèi)有關體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件或指導原則評估試劑的空白限、檢出限與定量限，并提交研究資料。

5.7分析特異性

5.7.1采用多種方法對申報抗體與靶抗原結(jié)合的特異性驗證研究，如采用競爭性抑制法、抗體與抗原純品的結(jié)合研究、免疫印跡技術或胞膜抗原的基因轉(zhuǎn)染技術等方法對抗原抗體結(jié)合的特異性進行相關的驗證；有關靶抗原的細胞或組織分布特異性的研究，如抗體與不同細胞系的反應譜等。

5.7.2交叉反應性：通過試驗或風險分析驗證所申報抗體除與目標抗原的結(jié)合外，是否與樣本中可能存在其他內(nèi)生或外源物質(zhì)發(fā)生交叉反應，如：與待測抗原有相似化學結(jié)構或抗原表位的蛋白、激素或近期服用的某些藥物等。

5.7.3干擾：本處所指的干擾是指經(jīng)過生產(chǎn)商指定的樣本處理方法后，檢測時是否還存在其他影響結(jié)果的干擾因素或干擾物質(zhì)。如有，生產(chǎn)商應進行說明并驗證（使用醫(yī)學相關水平的干擾物濃度進行驗證）；另外，亦建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（最差條件）條件下進行評價。

5.8線性范圍

本類產(chǎn)品線性主要包括稀釋細胞濃度范圍和標記抗體陽性細胞的百分率范圍兩種線性范圍。申請人可根據(jù)實際需要及以往的研究習慣自行選擇其中一種對線性的要求進行驗證。申請人應對每個測量參數(shù)建立合理的線性范圍，在建立一個參數(shù)的線性范圍時，應該盡量將預期測定范圍加寬，在合理范圍內(nèi)選擇7～11個濃度水平，每個水平2～4份復制液，取每個濃度水平重復測量的均值用于線性回歸分析，依據(jù)試驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出最寬的線性范圍，如采用回歸方法統(tǒng)計線性分析的結(jié)果，則擬合回歸直線的判定系數(shù)（R2）應不小于0.95。

建立稀釋細胞濃度線性范圍時，所用的樣本基質(zhì)應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，建議采用混合血漿或自體血漿進行稀釋，同時應考慮多倍稀釋可能造成的基質(zhì)效應。對于標記抗體陽性細胞百分率的線性范圍，建議申請人選擇經(jīng)確認的陽性細胞株和陰性細胞株按照恒定的細胞總數(shù)將兩種細胞進行不同比率的混合，陽性細胞數(shù)與陰性細胞數(shù)比例可以從0%到100%不等，從而確認合理的有關陽性細胞百分率的線性范圍。

6.穩(wěn)定性研究

穩(wěn)定性研究主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、高溫加速破壞穩(wěn)定性（如適用）、運輸穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性（如適用）、復溶穩(wěn)定性（如適用）、凍融次數(shù)限制（如適用）等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論，可參考YY/T 1579《體外診斷醫(yī)療器械體外診斷試劑穩(wěn)定性評價》的相關要求進行研究。對于實時穩(wěn)定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

7.參考區(qū)間

研究資料應詳細描述用于參考區(qū)間確定參考人群的地域、年齡、性別、種族等特征，并對統(tǒng)計分析方法進行詳細解釋?？梢詤⒖紘鴥?nèi)或國外有關參考區(qū)間制定的指南文件推薦的方法進行。不同種族、年齡或性別人群如有明顯差異應分別進行相關的統(tǒng)計分析并設置不同的參考區(qū)間。

8.其他資料

8.1三批產(chǎn)品的生產(chǎn)及自檢記錄。

8.2證明產(chǎn)品安全性、有效性的其他非臨床研究資料。

（四）臨床評價資料

根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關要求，如申請試劑已列入《免于臨床試驗體外診斷試劑目錄》，申請人可按照《免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術指導原則》要求進行臨床評價。

如申請試劑未列入《免于臨床試驗體外診斷試劑目錄》，或申請人無法按要求開展臨床評價的，則應按照《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求開展臨床試驗。

下面僅對臨床試驗中的基本問題進行闡述。

1.樣本量要求

應符合《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》中樣本量的相關要求。

2.臨床試驗機構的選擇

對于需要進行臨床試驗的流式細胞儀配套用檢測試劑，第二類產(chǎn)品應選擇不少于2家（含2家）符合要求的臨床試驗機構、新研制產(chǎn)品應選擇不少于3家（含3家）符合要求的臨床試驗機構開展臨床試驗。建議在國內(nèi)不同城市選擇臨床試驗機構，盡量使各機構的臨床樣本有一定地域代表性；臨床試驗機構須具有流式細胞儀專業(yè)的技術人員及相應的儀器設備，確保該項試驗的實施。試驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個試驗中，考核試劑和參比試劑都應處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進行校準，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。流式細胞儀檢測的專業(yè)性較強，試驗操作人員須接受過流式細胞儀技術的專業(yè)培訓，并經(jīng)過考核合格后上崗，具備實驗室檢測和臨床病情相結(jié)合的流式細胞儀相關的檢測經(jīng)驗。

3.臨床試驗研究方法

3.1境內(nèi)已有同類試劑批準上市產(chǎn)品的臨床研究：

選擇中國境內(nèi)已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對照試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究，證明考核試劑與已上市產(chǎn)品等效。

3.2境內(nèi)尚無同類試劑批準上市的產(chǎn)品臨床研究：

可以選擇國外已上市、普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對照試劑，采用考核試劑與之進行對比試驗研究，證明本品與對照試劑等效。同時，還應結(jié)合每個患者的臨床病情對申報試劑的檢測結(jié)果進行綜合判斷，如有必要，需對研究對象進行相關的跟蹤監(jiān)測研究，以綜合評價申報試劑的檢測結(jié)果，驗證其與臨床病情的一致性。

4.試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構的方案設置應基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。整個試驗過程應在臨床試驗機構的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉試驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

5.受試者選擇

臨床試驗方案中應根據(jù)試驗體外診斷試劑的預期用途、目標人群和檢測要求等合理確定臨床試驗受試者入組/排除標準，受試者應來自產(chǎn)品預期用途所聲稱的適用人群（目標人群）。

絕大多數(shù)采用流式細胞儀方法檢測的血細胞或組織細胞抗原對于疾病診斷的靈敏度和特異性較低，與器官/組織定位、疾病良惡性區(qū)分以及與病情的進展程度雖有一定關聯(lián)但多無明確的量值-病情相關關系，而且，多數(shù)情況下，該類試劑在用于病變的診療時需要多個標記物組合檢測才能體現(xiàn)其臨床意義。因此，在進行臨床研究時，除有針對性選擇目的性較強的病例外，還應選擇部分其他相關的抗原表達類似或需鑒別診斷的病例。

6.倫理學要求

臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學準則，必須獲得臨床試驗機構倫理委員會的同意。研究者應考慮臨床試驗用樣本的獲得和試驗結(jié)果對受試者的風險性，應提交倫理委員會的審查意見及受試者的知情同意書。對于例外情況，如客觀上不可能獲得受試者的知情同意或該臨床試驗對受試者幾乎沒有風險，可經(jīng)倫理委員會審查和批準后免于受試者的知情同意。

7.結(jié)果差異樣本的驗證

數(shù)據(jù)分析時，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異或與臨床方案中的標準出現(xiàn)偏差的樣本，臨床試驗研究人員應對差異原因進行合理分析，包括樣本處理、檢測操作、設門/分析過程中可能出現(xiàn)的干擾或錯誤，差異樣本亦可能由于樣本的個體差異所致。如果經(jīng)綜合分析無法確認差異原因，且偏差樣本有統(tǒng)計學意義，則應進行必要的重復檢測并采用公認的“金標準”方法或第三方試劑進行復核。

8.統(tǒng)計方法

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關分析、線性回歸、生存分析、受試者工作特征（ROC）曲線分析等。對于對比試驗的等效性研究，最常用是對試驗試劑和對照試劑的兩組檢測結(jié)果的相關及線性回歸分析，如適用，應重點觀察相關系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸方程斜率（b）及y軸截距（a）等指標。在臨床試驗方案中應明確統(tǒng)計檢驗假設，即評價試驗試劑與對照試劑是否等效的標準。

9.臨床試驗結(jié)果報告

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。

9.1臨床試驗總體設計及方案描述

9.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

9.1.2受試者入組/排除標準、樣本量的估算。

9.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

9.1.4統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。

9.2具體的臨床試驗情況

9.2.1考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息；考核試劑該批次自檢或經(jīng)其他機構檢測合格情況；參比試劑的境內(nèi)外批準情況等信息。

9.2.2對各試驗機構的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

9.2.3質(zhì)量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質(zhì)控品運行情況。

9.2.4具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。

9.3統(tǒng)計學分析

9.3.1數(shù)據(jù)預處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

9.3.2相關性和一致性分析

可以采用線性回歸的方式驗證兩種試劑結(jié)果的相關性，以y=a+bx和R2的形式列出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)，同時應給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結(jié)果應無明顯統(tǒng)計學差異。

另外考慮到某些檢測指標在不同的樣本濃度區(qū)間、不同年齡段人群或不同疾病來源的樣本可能有較明顯的差異，因此，如有必要，建議以上述相關要素為依據(jù)分組并對各組數(shù)據(jù)分別進行統(tǒng)計分析，以更好的驗證兩種試劑的相關性。

9.4討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

10.接受境外臨床試驗數(shù)據(jù)要求

如進口產(chǎn)品提交境外臨床試驗資料作為臨床評價資料時，其境外臨床試驗資料需滿足《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗數(shù)據(jù)技術指導原則》和《使用體外診斷試劑境外臨床試驗數(shù)據(jù)的注冊審查指導原則》的要求。

（五）產(chǎn)品說明書和標簽樣稿

產(chǎn)品說明書承載了產(chǎn)品預期用途、試驗操作方法、檢測結(jié)果解釋以及相關注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，也是體外診斷試劑注冊申報的重要文件之一。流式細胞儀檢測專業(yè)性較強，對產(chǎn)品說明書的編制進行必要的指導顯得更為重要。該類產(chǎn)品說明書除對抗體試劑做必要的介紹外，還應對樣本采集、樣本處理及保存、儀器校準、檢測質(zhì)量控制、結(jié)果分析等相關步驟作詳細描述，以保證分析結(jié)果的準確性和可重復性。最小銷售單元標簽樣稿內(nèi)容應當符合相關法規(guī)、規(guī)章、規(guī)范性文件、強制性標準的要求。

產(chǎn)品說明書的格式應符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則（2023年修訂版）》的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應盡量保持與原文說明書的一致性及完整性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨列明文獻的相關信息。結(jié)合相關法規(guī)要求及流式細胞分析的特性，下面對流式細胞儀配套用檢測試劑說明書的重點內(nèi)容作詳細說明，以指導注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產(chǎn)品名稱】

單色試劑通用名稱建議采取以下命名方式：被檢標志物名稱+檢測試劑（盒）（流式細胞儀法-熒光素）。多色試劑的命名可以結(jié)合靶抗原、目標細胞或組織、熒光素及臨床預期用途等信息綜合進行判斷，可采用如下命名方式：被檢標志物名稱1、2、3+檢測試劑（盒）（流式細胞儀法-熒光素），如有其它情形應詳細描述命名確定依據(jù)。

2.【包裝規(guī)格】

注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內(nèi)容均應采用中文進行表述。如產(chǎn)品有不同組分,可以寫明組分名稱。如有貨號，可增加貨號信息。

3.【預期用途】

第一段內(nèi)容詳細說明檢測的分析物、檢測類型、樣本類型，第二段應詳細說明預期用途，其余段落對被測分析物進行背景介紹、說明與預期用途相關的臨床背景情況、說明相關的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法、說明被測分析物與臨床適應證的關系等。應至少包括以下幾部分內(nèi)容：

3.1適用的樣本類型：如血液、骨髓液、其他體液或組織細胞等，并明確對所需抗凝劑的要求。

3.2待測靶抗原的特征簡介，如分子結(jié)構、分子量、產(chǎn)生和代謝主要途徑、表達細胞等。

3.3與被檢標志物相關的臨床背景介紹、正常表達情況、異常表達的主要疾病等。

4.【檢驗原理】

詳細說明檢驗原理、方法，必要時可采用圖示方法描述。

5.【主要組成成分】

5.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度信息。生物活性物質(zhì)應說明其生物學來源、活性及其他特性。說明主要是對特定熒光素標記的抗體特征的描述，應包括抗體特異性，雜交瘤細胞，免疫球蛋白特征，熒光激發(fā)及發(fā)射波長，偶聯(lián)的熒光素，抗體濃度以及其他非抗體成分組成及濃度。如包括多種不同熒光素標記的抗體，則應對不同的抗體分別列表詳述上述特征。

5.2對于多組分試劑盒，明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

5.3試劑盒內(nèi)如包含校準品和/或質(zhì)控品，應說明其主要組成成分及其生物學來源，校準品應注明其定值及溯源性。質(zhì)控品應注明靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。

5.4建議將檢測需要但本試劑盒未提供的主要材料進行列舉：如與之配套使用的紅細胞溶解試劑、稀釋劑等，并列明其產(chǎn)品名稱、注冊人（備案人）、貨號及其注冊證編號（備案編號）。

5.5若有配合使用的單獨注冊的軟件，列明軟件名稱、發(fā)布版本號、注冊人、注冊證號等信息。

6.【儲存條件及有效期】

6.1說明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性等有關試劑保存的重要信息。

6.2若試劑盒各組分的保持條件不一致，應分別描述。若各組分的有效期不同，則試劑盒的有效期為最短保存時間。

6.3明確生產(chǎn)日期、使用期限/失效日期/有效期至見標簽。

7.【適用儀器】

說明所有適用的儀器及型號，并提供與儀器有關的重要信息以指導用戶操作。

8.【樣本要求】

樣本采集和處理的目標是獲得均勻的單細胞或其他生物微粒的懸液，同時必須盡量保證其活力和完整性。樣本操作不宜過度，避免對其結(jié)構和抗原性造成破壞。故對于流式細胞分析而言，樣本處理對試驗結(jié)果至關重要，應盡量減少由于樣本采集或處理不當對試驗造成的影響。

在產(chǎn)品說明書中應重點對以下內(nèi)容予以明確：

8.1適用的樣本類型、所需的樣本量、采樣方法（對抗凝劑或抗凝管的要求）及樣本采集的注意事項，盡量引述相關標準操作規(guī)程。

8.2樣本處理：溶血洗滌（或非洗滌）、細胞分離和提純描述、離心和固定等方法；樣本保存、轉(zhuǎn)運的條件和方法。

8.3染色前穩(wěn)定性：即采樣后在合理的保存條件下，多長時間內(nèi)必須進行抗體標記（染色）；如果不同抗凝劑樣本的穩(wěn)定時間有差異，則應分別進行闡述。

8.4染色后穩(wěn)定性：即樣本在完成抗體標記后至上機分析前可以穩(wěn)定保存的條件及期限，最好結(jié)合染色前穩(wěn)定性的要求對上機分析前的穩(wěn)定性進行綜合闡述。

8.5避免使用的樣本類型，如有微生物污染、乳糜、凝集或細胞活力不達標準等，在一般情況下應避免使用上述樣本，除非樣本有不可替代性，則應說明處理該種樣本的方法，并應在結(jié)果報告時明示。

8.6達到最佳染色效果所要求的目標細胞濃度、計數(shù)方法及相關注意事項。

8.7樣本處理過程可能對細胞活性造成一定影響而導致活性細胞的比例降低，如果細胞活性對試驗結(jié)果的解釋非常重要，生產(chǎn)商需提供細胞活性的評估方法，避免非活性細胞的非特異性結(jié)合從而影響檢測結(jié)果。

8.8優(yōu)化為最佳染色效果所需注意的重要信息；其他有關樣本采集、處理及保存的注意事項。

9.【檢驗方法】

對于流式細胞分析而言，試驗操作步驟對試驗結(jié)果的影響至關重要，因此，應詳細說明達到最佳染色效果的試驗操作各個步驟，包括：

9.1試劑使用條件：溫度/濕度條件（如有必要）、試劑用量、染色時間、是否需無菌操作等。

9.2簡述試驗開始前流式細胞儀的設置方法，校準及質(zhì)控程序。

9.3詳細闡述試驗操作步驟、注意事項。如對照的設定方式及類別（同型陰性對照、陽性對照、正常人血細胞對照等），設門方法舉例及代表性數(shù)據(jù)圖示；靶細胞分類計數(shù)的方法及步驟、計算公式以及相關注意事項。

9.4校準：詳細描述校準品的準備和使用方法、推薦的校準周期及相關注意事項。

9.5質(zhì)量控制：詳細描述質(zhì)控品的使用、質(zhì)量控制方法。建議在質(zhì)量控制環(huán)節(jié)注明以下字樣：“如果質(zhì)控結(jié)果與預期不符，實驗室應重復試驗以保證結(jié)果的可靠性。如不能獲得可靠性結(jié)果，則不應出具檢測報告?！睂嶒炇覒撠熧|(zhì)量控制失敗的解決方案。

10.【參考區(qū)間】

應包含參考區(qū)間確定的基本信息，包括：樣本量、參考人群特征（如性別、年齡、種族等）和參考區(qū)間確定采用的統(tǒng)計學方法。

建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。

11.【檢驗結(jié)果的解釋】

由于流式細胞儀分析技術的專業(yè)性較強，檢測過程中的影響因素較多且同一分析目標在不同人群的表達復雜多樣，因此，流式細胞檢測的數(shù)據(jù)分析、結(jié)果解釋和出具臨床報告經(jīng)常具有較大的挑戰(zhàn)性，結(jié)果解釋不當可能對病人的診治造成很大影響。建議負責數(shù)據(jù)解釋和出具報告的試驗人員需經(jīng)過正規(guī)的技術培訓且有一定的臨床經(jīng)驗，二者結(jié)合有助于對試驗數(shù)據(jù)作出合理的醫(yī)學解釋。

產(chǎn)品說明書中的本部分內(nèi)容應對上述情況進行必要的建議，還應對設門方法、數(shù)據(jù)分析、異常值處理、臨床相關提示等內(nèi)容作出合理解釋。

12.【檢驗方法的局限性】

12.1本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。

12.2使用該試劑的其他限制，如樣本、保存方法、保存時間，特殊患者可能出現(xiàn)的不正確結(jié)果，儀器設置不當?shù)挠绊懙取?/p>

12.3是否與經(jīng)其他試劑或儀器獲得的同類數(shù)據(jù)具有直接可比性。

13.【產(chǎn)品性能指標】

詳述以下性能指標：

13.1對精密度的研究情況進行總結(jié)。

13.2 對準確度的研究情況進行總結(jié)。

13.3線性：包括細胞計數(shù)濃度范圍和待測目標物陽性細胞百分比濃度范圍兩類，申請人應對適于待測標記物的至少一個指標進行合理驗證，簡要注明試驗方法、所用儀器及軟件等信息。

13.4分析特異性：有關交叉反應和干擾因素的驗證信息或風險分析。如：對溶血、高脂、黃疸等內(nèi)源性干擾因子的濃度限值要求，樣本中可能存在某些內(nèi)生物質(zhì)與待測抗原有相似化學結(jié)構或抗原表位，如自身抗體、蛋白、激素或近期服用的某些藥物（如生物制劑），這些物質(zhì)可能與試劑中的抗體發(fā)生交叉反應而影響檢測結(jié)果，如未進行相關研究也應提供相關警示說明。

14.【注意事項】

應至少包括以下內(nèi)容：

14.1生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)質(zhì)控品/校準品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項目的檢測，結(jié)果為陰性，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應將這些組分作為潛在傳染源對待。接觸到的臨床樣本、試驗廢棄物等材料應當作為潛在傳染物進行處理，并且采用符合法規(guī)的預防措施對其處理。

14.2有關儀器設置的警示，如：流式細胞儀未經(jīng)正確校準、熒光滲漏未行合理補償以及檢測區(qū)域（設門）未精確定位，則可能產(chǎn)生錯誤的檢測結(jié)果。

14.3有關試劑準備的注意事項：如冷藏避光保存、切勿冷凍、使用前恢復室溫等。

14.4針對某些白細胞濃度過高或過低的情況，在樣本處理時需采用的特殊處理方式，如血樣稀釋或細胞濃縮等操作。

14.5試劑特殊成分或操作使用試劑危害性的警告及注意事項：如疊氮化鈉、甲醛等；使用不當?shù)奶幚矸绞健?/p>

14.6保證試驗結(jié)果準確的其他操作注意事項。

14.7注明本品僅用于體外診斷。

14.8試驗操作人員應接受過流式細胞儀檢測的專業(yè)培訓，具備相關的試驗操作資格，實驗室應具備合理的生物安全防備設施及防護程序。

15.【標識的解釋】

如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。

16.【參考文獻】

注明引用的參考文獻。

17.【基本信息】

17.1境內(nèi)體外診斷試劑

17.1.1注冊人（備案人）與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標注基本信息：注冊人（備案人）/生產(chǎn)企業(yè)名稱、住所、聯(lián)系方式、售后服務單位名稱、聯(lián)系方式、生產(chǎn)地址、生產(chǎn)許可證編號或者生產(chǎn)備案憑證編號。

17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標注基本信息：注冊人（備案人）名稱、住所、聯(lián)系方式、售后服務單位名稱、聯(lián)系方式、受托企業(yè)的名稱、住所、生產(chǎn)地址、生產(chǎn)許可證編號或者生產(chǎn)備案憑證編號。

17.2進口體外診斷試劑

按照以下格式標注基本信息：注冊人（備案人）/生產(chǎn)企業(yè)名稱、住所、生產(chǎn)地址、聯(lián)系方式、售后服務單位名稱、聯(lián)系方式、代理人的名稱、住所、聯(lián)系方式。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術要求編號】（【醫(yī)療器械備案憑證編號/產(chǎn)品技術要求編號】）

注明該產(chǎn)品的注冊證編號或者備案憑證編號。

19.【說明書批準日期/生效日期及修改日期】

注明該產(chǎn)品說明書的批準日期/生效日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應該同時注明說明書的修改日期。

（六）質(zhì)量管理體系文件

質(zhì)量管理體系文件主要包括綜述、章節(jié)目錄、生產(chǎn)制造信息、質(zhì)量管理體系程序、管理職責程序、資源管理程序、產(chǎn)品實現(xiàn)程序、質(zhì)量管理體系的測量、分析和改進程序、其他質(zhì)量體系程序信息、質(zhì)量管理體系核查信息等內(nèi)容，應符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》的相關要求。

三、參考文獻

[1]GB/T 42062-2022,醫(yī)療器械 風險管理對醫(yī)療器械的應用[S].

[2]YY/T 1579-2018,體外診斷醫(yī)療器械體外診斷試劑穩(wěn)定性評價[S].

[3]國家食品藥品監(jiān)督管理總局.6840體外診斷試劑分類子目錄(2013年):食品藥品監(jiān)管總局通知242號[Z].

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[5]國家食品藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械注冊單元劃分指導原則:總局通告2017年第187號[Z].

[6]國家市場監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊與備案管理辦法:國家市場監(jiān)督管理總局令第48號[Z]..

[7]國家藥品監(jiān)督管理局.關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告:國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號[Z].

[8]國家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單:國家藥監(jiān)局公告2021年第122號[Z].

[9]國家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則:國家藥監(jiān)局通告2022年第8號[Z].

[10]國家藥品監(jiān)督管理局.免于臨床試驗體外診斷試劑目錄：國家藥監(jiān)局通告2021年第70號[Z].

[11]國家藥品監(jiān)督管理局.免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術指導原則:國家藥監(jiān)局通告2021年第74號[Z].

[12]國家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則:國家藥監(jiān)局通告2021年第72號[Z].

[13]國家食品藥品監(jiān)督管理局.接受醫(yī)療器械境外臨床試驗數(shù)據(jù)技術指導原則:食品藥品監(jiān)督管理總局通告2018年第13號[Z].

[14]國家藥品監(jiān)督管理局.使用體外診斷試劑境外臨床試驗數(shù)據(jù)的注冊審查指導原則:國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第95號[Z].

[15]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評中心.體外診斷試劑說明書編寫指導原則（2023年修訂版）:國家藥監(jiān)局器審中心關于發(fā)布體外診斷試劑主要原材料研究注冊審查指導原則等12項注冊審查指導原則的通告2024年第1號[Z].

[16]中華人民共和國國務院.醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例:中華人民共和國國務院令第739號[Z].

[17]國家藥品監(jiān)督管理局.《國家藥監(jiān)局關于第一類醫(yī)療器械備案有關事項的公告:2022年第62號[Z].

附件

流式細胞分析

流式細胞分析是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析的檢測手段，可以在短時內(nèi)高速分析大量細胞或生物粒子的物理和化學特征參數(shù)。流式細胞分析主要靠流式細胞儀和各種特定發(fā)光物質(zhì)標記的抗體試劑組合檢測來實現(xiàn)。流式細胞儀是集電子技術、計算機技術、激光技術、流體理論等技術原理于一體進行流式細胞分析的儀器，其工作原理為：將待測細胞或微粒進行特異性染色標記后制成單細胞或微粒的懸液標本，在一定氣體壓力下將待測樣品壓入流動室，用不含細胞或微粒的緩沖液（鞘液）在高壓下從鞘液管噴出，包繞著細胞或微粒高速流動形成圓形流束（鞘流），依次通過流式細胞儀的檢測區(qū)域。被熒光染色的細胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。前向散射光和側(cè)向散射光檢測器把散射光信號轉(zhuǎn)換成電信號，熒光則被聚光器收集，不同顏色熒光被雙色反光鏡轉(zhuǎn)向不同的光電倍增管檢測器，把熒光信號轉(zhuǎn)換成電信號。散射光信號和熒光信號經(jīng)過放大后，再經(jīng)過數(shù)據(jù)化處理輸入電腦并儲存，根據(jù)散射光和熒光信號對細胞或微粒進行分類或計數(shù)。其中，前向散射光反映了細胞體積的大小，側(cè)向散射光則反應細胞部分結(jié)構的信息；熒光信號強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其細胞內(nèi)、核內(nèi)物質(zhì)的濃度。臨床流式細胞分析是將流式細胞分析技術與方法應用于臨床醫(yī)學，與臨床疾病的診斷、分型、治療、預后及預防等相結(jié)合的綜合應用學科。其應用范圍廣泛，包括細胞生物學、血液免疫學、腫瘤學、感染性疾病、造血干細胞移植、器官移植等多個方面。臨床流式細胞分析要求試驗人員對整個分析系統(tǒng)、各種相關試驗技術和方法有深入理解和掌握，并能對檢測結(jié)果給予合理的醫(yī)學解釋。