附件：丙型肝炎病毒核糖核酸測(cè)定試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2015年第93號(hào)）.doc

丙型肝炎病毒核糖核酸測(cè)定試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）核糖核酸(ribonucleic acid, RNA)測(cè)定試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)丙型肝炎病毒核糖核酸測(cè)定試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。如申請(qǐng)人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則未包含的研究?jī)?nèi)容，可自行補(bǔ)充。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

（一）臨床背景

丙型肝炎是一種主要經(jīng)血液傳播的疾病，丙型肝炎病毒慢性感染可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝細(xì)胞癌，對(duì)患者的健康和生命危害極大，已成為嚴(yán)重的社會(huì)和公共衛(wèi)生問題。

（二）丙型肝炎感染分布

丙型肝炎呈全球性流行，是歐美及日本等國(guó)家終末期肝病的最主要原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)（2014），全球約1.85億人感染HCV，其中約1.5億為慢性感染，每年有35萬～50萬人死于丙肝并發(fā)癥，每年新發(fā)感染病例約300萬～400萬例。

HCV1b和2a基因型在我國(guó)較為常見，其中以1b型為主；某些地區(qū)有1a、2b和3b型報(bào)道；6型主要見于香港和澳門地區(qū)，在南方邊境省份也可見此基因型。

（三）HCV特點(diǎn)

HCV屬于黃病毒科(flaviviridae)，其基因組為單股正鏈RNA，易變異，目前可分為6個(gè)基因型及50多種不同亞型，按照國(guó)際通行的方法，以阿拉伯?dāng)?shù)字表示HCV基因型，以小寫的英文字母表示基因亞型(如1a、2b、3c等)?；?型呈全球性分布，占所有HCV感染的70％以上。

HCV基因組含有一個(gè)開放讀框(open reading frame,ORF)，編碼10余種結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白，NS3蛋白是一種多功能蛋白，氨基端具有蛋白酶活性，羧基端具有螺旋酶/三磷酸核苷酶活性；NS5B蛋白是RNA依賴的RNA聚合酶，為HCV復(fù)制所必需，是抗病毒治療的重要靶位，其末端具有核苷酸轉(zhuǎn)移酶活性，但由于RNA酶缺乏矯正功能不能修正錯(cuò)配，多次復(fù)制后易導(dǎo)致HCV多種變異產(chǎn)生。

（四）HCVRNA定量檢測(cè)

HCV RNA定量檢測(cè)方法包括實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-polymerase chain reaction，qRT-PCR)、分枝DNA(bDNA)等。本指導(dǎo)原則所指的HCV RNA測(cè)定試劑是指利用qRT-PCR方法的核酸檢測(cè)技術(shù)，以HCV基因序列為檢測(cè)靶標(biāo)，對(duì)人血清、血漿及其他人體樣本中的HCV RNA進(jìn)行體外定量檢測(cè)的試劑，可作為HCV現(xiàn)癥感染的證據(jù)和抗病毒療效評(píng)估的觀察指標(biāo)。

其他類同用途的核酸定量檢測(cè)方法可參照本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性確定其中具體內(nèi)容是否適用，如不適用，應(yīng)另行選擇符合自身方法學(xué)特性的技術(shù)要求或評(píng)價(jià)方法。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

本指導(dǎo)原則不適用于按照藥品管理的用于血源篩查用途的HCV RNA檢測(cè)試劑。

二、基本要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及其他等內(nèi)容，其中其他包括同類產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從方法學(xué)及檢出限等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說明》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料的研究資料

應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、酶、標(biāo)準(zhǔn)品或企業(yè)參考品等的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。如主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝應(yīng)穩(wěn)定；如主要原材料源于外購(gòu)，應(yīng)提供的資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對(duì)比試驗(yàn)資料、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。主要原材料的研究資料如下：

1.企業(yè)內(nèi)部參考品:應(yīng)詳細(xì)說明有關(guān)企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值過程等試驗(yàn)資料。建議優(yōu)先選擇不同型別的臨床陽性樣本制備內(nèi)部參考品以直接反映臨床實(shí)際情況并起到質(zhì)控的作用；企業(yè)也可選擇假病毒如蛋白包裹RNA（armored RNA）作為內(nèi)部參考品，假病毒的優(yōu)點(diǎn)是易制備、型別全且無生物安全性風(fēng)險(xiǎn)，但不像臨床樣本可以完整反應(yīng)實(shí)際的檢測(cè)效能。建議企業(yè)內(nèi)部參考品應(yīng)覆蓋1～6型，其中至少包括1、2、3型別的臨床陽性樣本，各型別參考品在同一濃度水平應(yīng)有多份。

陽性參考品：每個(gè)型別設(shè)置三個(gè)梯度并盡量覆蓋線性范圍，陽性參考品的亞型以及濃度需經(jīng)過可靠方法進(jìn)行確認(rèn)。

陰性參考品：可采用經(jīng)確認(rèn)無HCV感染的臨床樣本，還應(yīng)考慮納入其他近似病原體（乙型肝炎病毒，hepatitis B virus，HBV；人類免疫缺陷病毒，human immunodeficiency virus，HIV等）感染樣本。

檢測(cè)限參考品：檢測(cè)限參考品的原料要求參考陽性參考品。在進(jìn)行最低檢測(cè)限性能評(píng)估時(shí)，應(yīng)設(shè)置多個(gè)梯度，從擴(kuò)增反應(yīng)終體系核酸濃度進(jìn)行評(píng)價(jià)，建議采用95%（n≥20）的陽性檢出率作為最低檢測(cè)限確定的標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)設(shè)置檢測(cè)限參考品時(shí)，可以僅設(shè)置一個(gè)濃度水平，該水平可略高于95%的陽性檢出率水平，而設(shè)置為100%檢出，應(yīng)明確參考品中靶核酸的濃度水平。

精密度參考品：精密度參考品原料要求同陽性參考品，應(yīng)對(duì)弱陽性、中或強(qiáng)陽性水平的精密度進(jìn)行驗(yàn)證；如有必要，建議同時(shí)設(shè)置陰性參考品對(duì)精密度進(jìn)行驗(yàn)證。

2.試劑盒內(nèi)對(duì)照品（質(zhì)控品）

試劑盒的質(zhì)控體系通過設(shè)置各種試劑盒對(duì)照品來實(shí)現(xiàn)，質(zhì)控體系需考慮對(duì)樣本核酸分離/純化、配液及加樣、試劑及儀器性能、擴(kuò)增反應(yīng)抑制物（管內(nèi)抑制）、交叉污染、靶核酸降解等因素可能造成的假陰性或假陽性結(jié)果進(jìn)行合理的質(zhì)量控制。對(duì)照品可采用人血清（血漿）或假病毒進(jìn)行配制。申報(bào)資料應(yīng)對(duì)試劑盒對(duì)照品有關(guān)原料選擇、制備、定值過程等試驗(yàn)資料詳細(xì)說明。HCV RNA定量檢測(cè)試劑的質(zhì)控品應(yīng)至少設(shè)置三個(gè)量級(jí)水平的系列質(zhì)控品:弱陽性質(zhì)控品、強(qiáng)陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品。校準(zhǔn)品和質(zhì)控品均應(yīng)參與樣本核酸的平行提取，以對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)過程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)量控制。企業(yè)應(yīng)對(duì)各質(zhì)控品的濃度范圍作出明確的范圍要求。

試劑盒質(zhì)控體系主要考慮以下幾方面：

陽性對(duì)照品（質(zhì)控品）

建議對(duì)每次檢測(cè)樣品反應(yīng)管設(shè)置強(qiáng)陽性對(duì)照品（質(zhì)控品）及弱陽性對(duì)照品，陽性對(duì)照品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取，以對(duì)樣本核酸分離/純化、試劑及儀器性能、擴(kuò)增反應(yīng)過程等環(huán)節(jié)進(jìn)行質(zhì)量控制，企業(yè)應(yīng)對(duì)各陽性對(duì)照品（質(zhì)控品）的濃度范圍做出明確要求。如，可采用陰性人血漿+假病毒制備，應(yīng)使用權(quán)威方法確認(rèn)陰性人血漿的生物安全性及無干擾性：抗-HCV、抗-HIV 1/2、HBsAg等檢測(cè)陰性，HCV RNA等檢測(cè)陰性。

陰性對(duì)照（質(zhì)控品）：

建議對(duì)每次檢測(cè)樣品反應(yīng)管設(shè)置陰性對(duì)照（質(zhì)控品），陰性對(duì)照品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取,以對(duì)可能存在的交叉污染產(chǎn)生的假陽性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。可采用陰性人血漿制備，應(yīng)使用權(quán)威方法確認(rèn)陰性人血漿的生物安全性及無干擾性，

3.校準(zhǔn)品：基質(zhì)應(yīng)采用人血清或血漿，并能溯源至國(guó)際/國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，單位應(yīng)使用IU/ml表示。提交完整溯源性文件，可參照GB/T 21415-2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測(cè)量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》進(jìn)行。

4.核酸分離/純化組分（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。

5.聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）組分的主要材料（包括引物、探針、內(nèi)標(biāo)、各種酶及其他主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)研究資料，主要包括以下內(nèi)容：

5.1脫氧三磷酸核苷（dNTP）

核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP、dTTP，對(duì)純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的詳細(xì)驗(yàn)證資料。

5.2引物

由一定數(shù)量的dNTP構(gòu)成的特定序列，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，如為自制，應(yīng)包括對(duì)序列準(zhǔn)確性、純度、穩(wěn)定性、功能性實(shí)驗(yàn)等方面的驗(yàn)證。如為外購(gòu)，應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的包括如上性能的質(zhì)檢證明，如聚丙烯酰胺凝膠電泳法（PAGE）結(jié)果或高效液相色譜法（HPLC）分析圖譜。

5.3探針

特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測(cè)。合成后經(jīng)PAEG或其他適宜方法純化，在5'-端標(biāo)記熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在3'-端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化,純度應(yīng)達(dá)到高效液相色譜純。如為外購(gòu)，應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明(HPLC分析圖譜)；應(yīng)對(duì)探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí)，并作HPLC分析。

5.4 RT-PCR反應(yīng)所需酶

通常包括以下幾種活性：①RNA依賴的DNA聚合酶活性: 以RNA為模板，催化dNTP聚合成DNA的過程。②核糖核酸酶H（RNase H）活性；由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子，將由RNase H從RNA 5'端水解掉RNA分子。③DNA依賴的DNA聚合酶活性；以反轉(zhuǎn)錄合成的第一條DNA單鏈為模板，以dNTP為底物，再合成第二條DNA分子。④熱穩(wěn)定性。

為了減少過程中產(chǎn)物污染，建議試劑盒組成體系增加降解反應(yīng)產(chǎn)物的體系，如尿嘧啶糖基化酶（UNG）等，應(yīng)對(duì)酶活性有合理驗(yàn)證，應(yīng)提供有關(guān)保存穩(wěn)定性、活性及功能性實(shí)驗(yàn)等的研究資料。

6.內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）的原料選擇、制備、定值過程及試驗(yàn)資料。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)標(biāo)的引物、探針和模板的濃度做精確驗(yàn)證， 內(nèi)標(biāo)設(shè)置應(yīng)合理，內(nèi)標(biāo)值應(yīng)在一定范圍內(nèi)設(shè)定上下限范圍且閾值循環(huán)數(shù)（Ct）值不受靶序列的明顯影響；通常選擇假病毒,因不能反映提取問題，內(nèi)標(biāo)不應(yīng)使用裸露RNA。

（三）主要工藝及反應(yīng)體系的研究資料

基本生產(chǎn)工藝主要包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對(duì)pH、電導(dǎo)率等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。

生產(chǎn)工藝研究的資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、穩(wěn)定性和有效期提供確切的依據(jù)，主要包括以下內(nèi)容：

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，應(yīng)用流程圖方式表示，并標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟。

2.反應(yīng)原理介紹。

3.基因位點(diǎn)選擇、PCR方法學(xué)特性介紹。

4.確定最佳PCR反應(yīng)體系的研究資料，包括酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度、樣本量、加樣量及反應(yīng)體積等，加樣量和反應(yīng)體積參考相應(yīng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)研究驗(yàn)證后確定。

5.確定PCR各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)的研究資料。

6.對(duì)于基線閾值（threshold）和Ct值確定的研究資料。

7.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件的對(duì)比分析，如果有差異應(yīng)分別詳述，并提供驗(yàn)證資料證明差異性對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。

（四）分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)提交生產(chǎn)者在產(chǎn)品研制后，在實(shí)際生產(chǎn)條件下連續(xù)生產(chǎn)三批并對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來源（如涉及）等。分析性能評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）文件或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。對(duì)于HCV RNA測(cè)定試劑，建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究：

1. HCV RNA提取純化

由于RNA酶的廣泛存在，血樣的保存運(yùn)輸以及RNA的提取純化均應(yīng)注意避免RNA酶的污染。

病毒RNA提取主要有以下目的：富集目的基因濃度、保證目的基因序列的完整性、增加PCR模板溶液均一性、去除PCR抑制物，是決定PCR成敗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因此，無論申報(bào)產(chǎn)品是否含有RNA分離/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)對(duì)核酸提取的環(huán)節(jié)做詳細(xì)的驗(yàn)證。臨床標(biāo)本中可能含有各式各樣的PCR抑制物，因此，對(duì)于RNA提取試劑的選擇，除最大量分離出目的RNA外，還應(yīng)有純化步驟（如磁珠提取法），盡可能去除PCR抑制物，避免使用無純化步驟的簡(jiǎn)易方法。

申請(qǐng)人應(yīng)結(jié)合申報(bào)產(chǎn)品的特性，合理選擇優(yōu)化RNA分離/純化試劑，建議包含純化步驟且內(nèi)標(biāo)、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均應(yīng)全程參與提取純化，并提供詳細(xì)的驗(yàn)證資料：應(yīng)至少包括提取效率、重復(fù)性和抗干擾研究。

2.最低檢出限與定量限

2.1最低檢出限與定量限的確定

建議使用國(guó)際參考品/國(guó)家參考品進(jìn)行梯度稀釋并多次檢測(cè)，將具有95%陽性檢出率的病毒水平作為最低檢出限。至少應(yīng)不高于國(guó)家參考品最低檢出限50IU/ml的要求，根據(jù)循證醫(yī)學(xué)中有關(guān)對(duì)HCV感染者進(jìn)行抗病毒治療效果及預(yù)后評(píng)估的需要，企業(yè)可根據(jù)自身產(chǎn)品性能情況和臨床診療指南設(shè)定檢測(cè)下限以符合臨床需求。定量限應(yīng)高于或等于檢出限，將多次（至少20次）測(cè)量的結(jié)果符合試劑準(zhǔn)確度要求的最低病毒水平作為定量限。

血清、血漿應(yīng)分別進(jìn)行最低檢測(cè)限的驗(yàn)證。

2.2最低檢出限和定量限的驗(yàn)證

申報(bào)試劑應(yīng)在最低檢出限或接近最低檢出限的丙型肝炎病毒濃度進(jìn)行驗(yàn)證，總測(cè)試數(shù)不少于60次。定量限的驗(yàn)證應(yīng)總測(cè)試數(shù)不少于40次。

企業(yè)應(yīng)能夠提供用于最低檢出限/定量限驗(yàn)證的病毒株的來源（1、2、3型）、型別確認(rèn)及滴度確認(rèn)試驗(yàn)等信息。

3.線性范圍

線性范圍確定的研究可使用高值臨床樣本（由可溯源至國(guó)家參考品/國(guó)際參考品的方法定量）或假病毒進(jìn)行梯度稀釋，稀釋液應(yīng)使用經(jīng)確認(rèn)為陰性的混合人血清或血漿，包含不少于9個(gè)濃度（應(yīng)包含接近最低檢測(cè)限的臨界值濃度），使用至少3個(gè)批次的試劑進(jìn)行試驗(yàn)。通過評(píng)價(jià)一定范圍內(nèi)的線性關(guān)系及各水平的準(zhǔn)確度確定該產(chǎn)品的線性范圍，評(píng)價(jià)的基因型別至少應(yīng)包括1、2、3型。

4.準(zhǔn)確度

對(duì)測(cè)量準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)依次包括：與國(guó)家參考品（和/或國(guó)際參考品）的比對(duì)研究、回收實(shí)驗(yàn)、方法學(xué)比對(duì)等方法，企業(yè)可根據(jù)實(shí)際情況選擇以下方法的一項(xiàng)或幾項(xiàng)進(jìn)行研究。

4.1國(guó)家/國(guó)際參考品驗(yàn)證

此類檢測(cè)試劑有相應(yīng)的國(guó)家/國(guó)際參考品，應(yīng)使用國(guó)家/國(guó)際參考品對(duì)試劑進(jìn)行驗(yàn)證，重點(diǎn)觀察對(duì)相應(yīng)參考品檢測(cè)結(jié)果的符合情況。

4.2回收試驗(yàn)。用于評(píng)估定量檢測(cè)方法準(zhǔn)確測(cè)定加入國(guó)家/國(guó)際參考品的能力，結(jié)果用回收率表示。通常對(duì)樣本進(jìn)行3～5次回收試驗(yàn)，取平均值即平均回收率。

回收試驗(yàn)注意事項(xiàng)：

4.2.1加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積一般應(yīng)小于樣本體積的10%；

4.2.2盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測(cè)物濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平；

4.2.3標(biāo)準(zhǔn)物的濃度應(yīng)該足夠高，以得到不同濃度的回收樣本；

4.2.4注意基質(zhì)效應(yīng)，盡量采用與臨床待測(cè)樣本一致的基質(zhì)。

4.3方法學(xué)比對(duì)

采用參考方法或國(guó)內(nèi)/國(guó)際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑作為對(duì)比方法，與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測(cè)一批病人樣品，從測(cè)定結(jié)果間的相關(guān)性了解擬申報(bào)試劑與參比方法間的一致情況。如顯著相關(guān)，說明兩檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)病人標(biāo)本測(cè)定結(jié)果基本相符，對(duì)同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，兩檢測(cè)系統(tǒng)不會(huì)產(chǎn)生顯著差異結(jié)果。
實(shí)施方法學(xué)比對(duì)前，應(yīng)分別對(duì)擬申報(bào)試劑和對(duì)比試劑進(jìn)行初步評(píng)估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。方法學(xué)比對(duì)時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、考慮樣本類型、濃度分布范圍等并對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（如，報(bào)告斜率和截距的95%置信區(qū)間）。

5.精密度

測(cè)量精密度的評(píng)價(jià)方法并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性，具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的文件進(jìn)行。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求：

5.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除申報(bào)試劑（包括提取組分和聚合酶鏈反應(yīng)組分）本身的影響外，還應(yīng)對(duì)PCR分析儀、操作者、地點(diǎn)等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。

5.2合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的連續(xù)檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

5.3用于精密度評(píng)價(jià)的質(zhì)控品應(yīng)至少包括兩個(gè)水平:

5.3.1弱陽性質(zhì)控品：待測(cè)物濃度呈弱陽性（高于定量限濃度1個(gè)數(shù)量級(jí)），陽性檢出率為100%且變異系數(shù)（CV）符合標(biāo)準(zhǔn)要求（n≥20）。

5.3.2強(qiáng)陽性質(zhì)控品：待測(cè)物濃度呈中度至強(qiáng)陽性，陽性檢出率為100%且CV符合標(biāo)準(zhǔn)要求（n≥20）。

6.HCV不同基因型的覆蓋：

應(yīng)至少對(duì)最低檢測(cè)限和線性范圍的評(píng)估覆蓋全部申報(bào)基因型，至少包括1、2、3型。

7.特異性

7.1交叉反應(yīng)

7.1.1用于HCV RNA檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類主要考慮以下幾方面可能性：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀（推薦種類見表1）。

7.1.2建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。通常，細(xì)菌感染的水平為106 cfu/ml或更高，病毒為105 pfu/ml或更高。

7.1.3申請(qǐng)人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒和細(xì)菌的來源、種屬/型別和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。有關(guān)交叉反應(yīng)驗(yàn)證的信息應(yīng)以列表的方式在產(chǎn)品說明書的【產(chǎn)品性能指標(biāo)】項(xiàng)中有所體現(xiàn)。

表1 用于交叉反應(yīng)研究的微生物（推薦）

7.2干擾物質(zhì)

7.2.1潛在的干擾物質(zhì)主要包括：內(nèi)源性物質(zhì)（見表2）和常用的治療藥物如普通干擾素IFN-α、復(fù)合IFN和聚乙二醇干擾素α、利巴韋林、粒細(xì)胞刺激因子（GMCSF）等，應(yīng)采用已報(bào)道峰濃度的幾倍藥物濃度進(jìn)行驗(yàn)證。

7.2.2使用醫(yī)學(xué)相關(guān)水平的干擾物濃度進(jìn)行驗(yàn)證，另外，亦建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度(最差條件)條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)于常見藥物干擾試驗(yàn)，建議參照相應(yīng)藥物藥代動(dòng)力學(xué)研究確定的治療藥物濃度添加相應(yīng)藥物進(jìn)行干擾驗(yàn)證。

7.2.3建議在病毒的檢測(cè)臨界值水平對(duì)每種干擾物質(zhì)的干擾影響進(jìn)行檢測(cè)。

表2 建議用于干擾研究的物質(zhì)（推薦）

*為必須驗(yàn)證的干擾物質(zhì)。

7.2.4使用HCV RNA陰性樣本（血清、血漿）進(jìn)行評(píng)估，評(píng)估試劑的特異性。

8.其他需注意問題

對(duì)于適用多個(gè)機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說明書【適用機(jī)型】項(xiàng)中所列的所有型號(hào)儀器的性能評(píng)估資料。如適用于不同樣本類型，應(yīng)提交對(duì)不同樣本類型一致性的驗(yàn)證，包括不同抗凝劑的采血管的驗(yàn)證。

（五）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括對(duì)不同樣本類型（血清、血漿）室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（六）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗(yàn)原理、試驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，進(jìn)口產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對(duì)HCV RNA測(cè)定試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)描述為：試劑用于定量檢測(cè)人血清/血漿樣本中的HCV RNA,用于需進(jìn)行HCV感染診斷的患者和接受抗病毒治療的丙型肝炎患者，應(yīng)當(dāng)說明該試劑能夠檢測(cè)的基因型別。檢測(cè)結(jié)果不得作為患者病情評(píng)價(jià)的唯一指標(biāo)，必須結(jié)合患者臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)對(duì)病情進(jìn)行綜合分析并明確說明該檢測(cè)試劑不得用于血源篩查。

應(yīng)對(duì)丙型肝炎病毒感染及治療臨床背景進(jìn)行簡(jiǎn)介。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒所包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，如定量標(biāo)準(zhǔn)品、陰/陽性質(zhì)控品含有人源組分，應(yīng)提供其生物學(xué)來源、活性及其他特性；說明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒中不包含但該項(xiàng)檢測(cè)必需的組分，說明書中應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱、注冊(cè)證號(hào)（如有）及其他相關(guān)信息。

2.3如果試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、注冊(cè)證號(hào)（如有）以及配套儀器等詳細(xì)信息。

3.【儲(chǔ)存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲(chǔ)存條件及效期。

應(yīng)按照《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（總局令第5號(hào)）增加生產(chǎn)日期，使用期限或者失效日期。

4.【樣本要求】

4.1樣本收集要求：結(jié)合臨床需要并參照丙型肝炎防治指南（現(xiàn)行版）推薦的采樣要求。

4.2血液樣本應(yīng)當(dāng)說明對(duì)采血管及抗凝劑的要求：明確樣本類型、采血管和抗凝劑，其他樣本應(yīng)說明樣本采集、處理及保存方式。

4.3樣本處理、運(yùn)送及保存：對(duì)血液樣本離心條件的要求，核酸提取前的預(yù)處理、運(yùn)送條件、保存條件及期限（短期、長(zhǎng)期）等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的要求。如有需要應(yīng)對(duì)高于檢測(cè)范圍的樣本稀釋方法進(jìn)行規(guī)定。

5.【適用機(jī)型】注明所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

6.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

6.1試劑準(zhǔn)備及配制方法、注意事項(xiàng)。

6.2詳述待測(cè)樣本、相關(guān)校準(zhǔn)品及質(zhì)控品核酸提取的條件、步驟及注意事項(xiàng)。

6.3核酸提取/純化方法的詳細(xì)介紹。

6.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

6.5 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。

6.6儀器設(shè)置：特殊參數(shù)、結(jié)合探針的熒光素標(biāo)記情況對(duì)待測(cè)基因及內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇。

6.7基線閾值、Ct值的選擇方法。

6.8校準(zhǔn)方法的描述。

6.9實(shí)驗(yàn)的有效性判斷：試劑盒內(nèi)陰/陽性質(zhì)控品、內(nèi)標(biāo)的Ct值要求。

7.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用IU/ml表示，結(jié)合陰、陽性質(zhì)控結(jié)果，對(duì)低于檢出限未檢出、低于定量限、檢測(cè)范圍內(nèi)及高于檢測(cè)范圍的檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行界定。

8.【檢驗(yàn)方法的局限性】

8.1本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

8.2可靠的結(jié)果取決于樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲(chǔ)存及處理程序。

8.3明確該試劑僅限于規(guī)定的樣本類型及適用機(jī)型。

8.4被試驗(yàn)處理劑和或探針覆蓋的病毒基因組高度保守片段內(nèi)部發(fā)生的突變可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)到的病毒含量偏低或者檢測(cè)不到病毒。

8.5 HCV RNA的定量取決于樣本中存在的病毒顆粒數(shù)，而這會(huì)受到樣本收集方法，病人因素（如年齡，是否存在癥狀）和/或感染階段等因素的影響。

9.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：

9.1評(píng)估方法、數(shù)據(jù)和結(jié)果。

9.2最低檢出限及定量限：說明試劑不同樣本類型的最低檢出濃度和最低定量濃度，簡(jiǎn)單介紹最低檢出限/定量限的確定方法以及對(duì)最低檢出限/定量限驗(yàn)證所采用的基因型。

9.3精密度：精密度參考品的組分、濃度及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、評(píng)價(jià)結(jié)果。

9.4線性范圍：確定線性范圍的方法、濃度范圍、相關(guān)系數(shù)等信息。

9.5對(duì)不同基因型的覆蓋：驗(yàn)證該試劑對(duì)HCV不同基因型的檢測(cè)效果。

9.6特異性：

9.6.1交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體核酸的驗(yàn)證情況，建議以列表的方式表示經(jīng)過交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體名稱、型別、濃度等信息。

9.6.2干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素等，應(yīng)注明可接受的最高限值。

9.6.3藥物影響：常用抗病毒藥物、干擾素等對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如未進(jìn)行相關(guān)研究也應(yīng)提供相關(guān)警示說明。

9.7臨床對(duì)比試驗(yàn)研究：簡(jiǎn)要介紹對(duì)比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。

10.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

10.1由于本試驗(yàn)涉及到病毒RNA的提取及PCR擴(kuò)增，應(yīng)小心避免試劑和擴(kuò)增反應(yīng)混合物受到污染。應(yīng)推薦定期監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增產(chǎn)物存在的方法及步驟。

10.2應(yīng)提示RNA提取擴(kuò)增過程中的注意事項(xiàng)。

10.3有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑盒內(nèi)校準(zhǔn)品、質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已通過乙肝炎表面抗原（HbsAg）、人類免疫缺陷病毒抗體（抗-HIV1/2）、丙型肝炎抗體（抗-HCV）等項(xiàng)目的檢測(cè)為陰性，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。提示對(duì)于潛在傳染源的處理方式。

10.4對(duì)于試劑中其他組分可能涉及到的潛在危險(xiǎn)的提示，如防腐劑如有疊氮鈉等的風(fēng)險(xiǎn)警示及處理方式。

10.5臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》配備設(shè)備及操作人員，應(yīng)嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行操作。

（七）產(chǎn)品技術(shù)要求

擬定產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）、《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說明》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的相關(guān)要求。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于技術(shù)要求正文后，應(yīng)將待測(cè)靶基因區(qū)域，引物/探針來源、各種酶的來源、特性以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等信息的重點(diǎn)內(nèi)容予以明確。

HCV RNA測(cè)定試劑的注冊(cè)檢測(cè)應(yīng)符合相應(yīng)國(guó)家參考品檢測(cè)要求，產(chǎn)品的性能指標(biāo)應(yīng)與說明書內(nèi)容相符。

如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。可參考《YY/T 1182-2010核酸擴(kuò)增用檢測(cè)試劑(盒)》。

（八）注冊(cè)檢驗(yàn)

根據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類產(chǎn)品應(yīng)在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢驗(yàn)。如有適用的國(guó)家參考品，應(yīng)采用國(guó)家參考品進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn)并符合要求。

（九）臨床評(píng)價(jià)資料

1.研究方法

對(duì)于該類試劑已有同類產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，采用擬申報(bào)產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。

建議預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇兩種對(duì)比試劑同時(shí)進(jìn)行驗(yàn)證，考察其誤差范圍，選擇其中一種作為正式試驗(yàn)的對(duì)比試劑，另一種可作為第三方試劑（建議在此對(duì)第三方試劑的選擇原則作簡(jiǎn)單介紹）。對(duì)比試劑的適用樣本類型及檢測(cè)范圍應(yīng)能夠涵蓋考核試劑的樣本及檢測(cè)性能要求，以免造成考核試劑部分性能無法驗(yàn)證的情況。

對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果不一致（檢測(cè)值差異較大）的樣本應(yīng)采用公認(rèn)較好的第三方試劑進(jìn)行驗(yàn)證。

強(qiáng)調(diào)：臨床試驗(yàn)研究應(yīng)使用說明書配套使用的提取純化試劑盒，并在方案中明示。

2.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇

建議申請(qǐng)人在選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)時(shí)，應(yīng)考慮到各試驗(yàn)機(jī)構(gòu)之間的平行性和一定的地域代表性，臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，考核試劑和對(duì)比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的對(duì)比試劑應(yīng)一致，以便進(jìn)行合理的匯總統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，同時(shí)方案中應(yīng)明確寫明對(duì)測(cè)定結(jié)果不符的樣本進(jìn)行確認(rèn)的第三方試劑或方法。

4.病例選擇及樣本類型

臨床試驗(yàn)樣本數(shù)應(yīng)不少于500例，其中應(yīng)主要選擇丙型肝炎患者樣本（陽性樣本），不少于450例。在病例選擇時(shí)應(yīng)考慮到地域性的差別，以1b及2a型為主，其他聲稱的可覆蓋基因型不少于10例，應(yīng)注重不同藥物治療的丙型肝炎患者。陽性樣本應(yīng)覆蓋試劑線性范圍，均勻分布高、中、低值。建議選擇不少于50例的陰性樣本進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)，陰性樣本主要考慮可能存在的交叉反應(yīng)情況，應(yīng)選擇其他類病毒性肝炎、其他病毒感染（如HIV）以及其他良性或惡性肝臟疾病患者（如，肝細(xì)胞癌、酒精肝、非酒精性脂肪肝、肝硬化、自身免疫性肝炎），以從臨床角度考察其特異性。

臨床試驗(yàn)中所涉及的樣本類型應(yīng)為實(shí)際臨床檢測(cè)中常用的樣本類型。對(duì)于增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型，在滿足一種樣本類型不少于500例的前提下，可增加臨床試驗(yàn)樣本數(shù)至少為200例，并在至少2家（含2家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展的臨床試驗(yàn)，其中陽性樣本應(yīng)包括強(qiáng)、中、弱陽性，在線性范圍內(nèi)均勻分布。

應(yīng)對(duì)臨床樣本進(jìn)行說明：新鮮或者為既往保存樣本，臨床研究應(yīng)以新鮮樣本為主。稀有基因型可使用既往保存樣本。基因型確認(rèn)可使用分型試劑或測(cè)序方法。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，對(duì)于本類產(chǎn)品對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，常用相關(guān)性、線性回歸對(duì)log10滴度結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，考察兩組數(shù)據(jù)之間是否存在相關(guān)性，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與對(duì)比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa檢驗(yàn)，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行符合率分析，計(jì)算陽性符合率、陰性符合率和總符合率。

6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對(duì)于兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果有不一致（檢測(cè)結(jié)果差異較大）的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”或其他合理的方法進(jìn)行復(fù)核，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)詳細(xì)說明理由。

7.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

7.1臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

7.1.1臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹。

7.1.2病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。

7.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

7.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

7.2具體的臨床試驗(yàn)情況

7.2.1申報(bào)試劑和對(duì)比試劑的名稱、批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信息，對(duì)比試劑廠商信息及產(chǎn)品醫(yī)療器械注冊(cè)證書號(hào)。

7.2.2對(duì)各研究單位的病例數(shù)、年齡分布情況、不同基因型分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

7.2.3質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估。

7.2.4具體試驗(yàn)過程，樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本長(zhǎng)期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。

7.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

7.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對(duì)方案的修改。

7.3.2兩組數(shù)據(jù)結(jié)果的相關(guān)性、線性回歸的結(jié)果。

7.3.3對(duì)相關(guān)性及線性方程的顯著性檢驗(yàn)，驗(yàn)證兩種試劑定量結(jié)果的一致性。

7.3.4陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區(qū)間。

7.3.5以交叉表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa檢驗(yàn)。

另外考慮到對(duì)不同樣本類型的檢測(cè)結(jié)果可能存在一定差異，故建議對(duì)不同樣本類型分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以對(duì)考核試劑的臨床性能進(jìn)行綜合分析。

7.4討論和結(jié)論

對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

三、名詞解釋

準(zhǔn)確度（accuracy）：一個(gè)測(cè)量值與可接受的參考值間的一致程度。

精密度（precision）：在規(guī)定條件下，相互獨(dú)立的測(cè)試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的測(cè)量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

線性（linearity）：在給定測(cè)量范圍內(nèi)，給出的測(cè)量結(jié)果與樣品中實(shí)際存在的被測(cè)量物的值成比例的能力。線性是描述一個(gè)測(cè)量系統(tǒng)的測(cè)量示值或測(cè)量結(jié)果相關(guān)于樣本的賦值符合直線的屬性。

分析特異性（analytical specificity）：測(cè)量程序只測(cè)量被測(cè)量物的能力。分析特異性用于描述檢測(cè)程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時(shí)只測(cè)量被測(cè)量物的能力。通常以一個(gè)被評(píng)估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度（潛在干擾物包括干擾物和交叉反應(yīng)物）。